تولید آنتی بادی تک زنجیره ای انسانی شده ضد مارکر cd۲۰ در e.coli
چکیده
زمینه و هدف: رتوکسی مب (rituximab) آنتی بادی مونوکلونال کایمریک بر ضد آنتی ژن cd20 بوده، به طور گسترده برای درمان لنفومای سلول های b استفاده می گردد. با این وجود سایز بزرگ و ایمنی زایی آنتی بادی های کامل موشی همواره به عنوان مشکل در ایمونوتراپی مطرح بوده است. جهت حل این مشکل می توان از قطعات کوچک آنتی بادی انسانی شده استفاده نمود. هدف از این تحقیق تولید آنتی بادی تک زنجیره ای انسانی به منظور کاربرد آن در درمان ناهنجاری های مرتبط با سلول های b است. روش بررسی: به منظور طراحی آنتی بادی rituximab انسانی شده با استفاده از روش cdr-grafting، نواحی cdr موشی به قسمت های framework ایمونوگلوبولین های germline انسانی منتخب دارای بیشترین شباهت با همتای موشی پیوند شدند. توالی نوکلئوتیدی طراحی شده درe.coli بیان شده، سپس تخلیص گردید. میزان بیان آنتی بادی نوترکیب با sds-page و واکنش آن با رده ی سلولی raji با استفاده از تکنیک dot blot مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: در انتخاب نواحی framework انسانی به منظور cdr graftingایمونوگلوبولین های ighv1-46*03و igkv1-39*01 بیشترین شباهت را با آنتی بادی اولیه نشان دادند. بررسی بیان با روش sds-page مشخص کرد آنتی بادی تولیدی با غلظت بالا در e.coli بیان گردیده، با افینیتی مناسب نسبت به آنتی ژن cd20 بیان شده در سطح سلول های raji واکنش نشان داد. نتیجه گیری: آنتی بادی تک زنجیره ای انسانی تولید شده می تواند به مارکر cd20 متصل گردیده، به عنوان روش درمانی برای هدف قرار دادن این آنتی ژن در درمان سرطان های مرتبط به کار رود.