تهیه سازه اختصاصی بذر حاوی قطعات omega و sar به منظور افزایش بیان ژن در بذر گیاه

مهسا مکانیک، خدیجه باقری، بهرام ملکی زنجانی، مسعود توحیدفر

چکیده

پایین­بودن سطح بیان ژن­ها، از مهم­ترین فاکتورهای محدودکننده تولید پروتئین­های نوترکیب در گیاهان می­باشد. انتخاب بافت مناسب گیاه جهت بیان و نیز بهبود تظاهر قطعه ژنی از جمله راه­های افزایش بیان ژن در گیاه می­باشند. در این پژوهش با طراحی و تهیه سازه اختصاصــــی بذر به­هــــمراه قطعـــات افزایـــنده بیــان ژن؛ omega(tobacco mosaic virus 5' –leader) و sar (scaffold attachment region) سعی شده است تا ضمن بیان اختصاصی ژن موردنظر در بذر گیاه، بیان آن نیز افزایش یابد. توالی omega مورد استفاده، به­عنوان یک تنظیم­کننده ترجمه عمل می­کند و کارآیی ترجمه را بالا می­برد و توالی sar با مکانیزم­های مختلف می­تواند از خاموشی ژن منتقل­شده جلوگیری کند. در ابتدا با طراحی آغازگرهای اختصاصی و انجام واکنش pcr قطعه omega به ابتدای ژن gus متصل شد. قطعه­ی sar (ps206-1) نیز از ژنوم گیاه توتون جداسازی گردید. سپس دو قطعه با استفاده از روش soeingpcr به هم متصل شدند به­نحوی­که توالی omega در بالادست ژن gus و توالی sar در پایین­دست آن قرار گرفت. صحت قطعه حاصله (ω-gus-ps206-1) با استفاده از هضم آنزیمی و توالی­یابی مورد تأیید قرار گرفت. سپس ساب­کلونینگ در ناقل گیاهی pbi121 حاوی پیش­برنده اختصاصی بذر انجام شد.