انتقال ژن بتا ۱و۳ گلوکاناز (bgni) از trichoderma virens به گیاه کلزا جهت ایجاد مقاومت علیه قارچ sclerotinia sclerotiorum
چکیده
کلزا به عنوان یکی از محصولات مهم زراعی نسبت به بسیاری از قارچهای بیماری زا حساس می باشد. یکی از روشهای ممانعت از نفوذ قارچهای بیماری زا به درون گیاهان، استفاده از آنزیمهای هیدرولازی نظیر گلوکانازها می باشد که باعث تجزیه دیواره این قارچها شده و قادرند از کلونیزه شدن آنها در گیاه جلوگیری نمایند. در این تحقیق جهت ایجاد مقاومت به قارچ sclerotinia sclerotiorum در گیاه کلزا، ژن bgni (کد کننده آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز) به این گیاه منتقل گردیده و میزان مقاومت آن مورد بررسی قرار گرفته است. بدین منظور ابتدا ژن bgni با منشاء قارچ trichoderma virens در وکتور بیانی pbi121gus- تحت پروموتر camv 35s کلون و با استفاده از الگوی pcr و هضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت. جهت انتقال ژن کلون شده از agrobacterium tumefaciens سویه lba4404 و ریزنمونه های کوتیلدونی استفاده گردید. جهت تشخیص گیاهان تراریخت به دست آمده از الگوی pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ، و نیز souther dot blot استفاده گردید. ارزیابی مقاومت گیاهان تراریخت در برابر قارچ s. sclerotiorum به روش radial diffusion assay انجام گرفت. آنالیز نتایج به دست آمده نشان داد که گیاهان تراریخت، نسبت به گیاه شاهد (کلزای غیر تراریخت) در برابر قارچ s. sclerotiorum از مقاومت بیشتری برخوردار می باشند.