طراحی و ساخت سازه های بیانی گیاهی جهت انتقال ژنهای chit ۴۲ و bgn۱۳.۱ قارچ تریکودرما به صورت منفرد و توأم
چکیده
قارچهای بیماریزا از جمله مهمترین عوامل ایجاد خسارت در محصولات کشاورزی میباشند. یکی از روشهای مبارزه با بیماریهای قارچی استفاده از مهندسی ژنتیک برای انتقال ژنهای رمزکننده آنزیمهای هیدرولازی، خصوصاً کیتینازها و گلوکانازها به گیاهان زراعی است. قارچهای آنتاگونیست مانند تریکودرما، با تولید آنزیمهای هیدرولازی قدرتمند کیتیناز و گلوکاناز، اثر بازدارنده قابل توجهی بر رشد قارچهای بیماریزا داشته و آنزیمهای جدا شده از گونه های مختلف این قارچ، بسیار مؤثرتر از آنزیمهای جدا شده از منابع دیگر میباشند. در این تحقیق از ژنهای کیتیناز chit42 و گلوکاناز bgn13.1 به ترتیب جدا شده از قارچهای trichoderma atroviride و t. virens، جهت ساخت سه سازه بیانی گیاهی شامل دو سازه تک ژنی کیتیناز (pbike1) و گلوکاناز (pbike2) و یک سازه واجد هر دو ژن مذکور تحت کنترل پروموتر camv 35s و ترمیناتور نوپالین سینتاز (nos) جداگانه (pbike3) استفاده شده است. همچنین در طی مراحل ساخت این سازهها، ناقلی با نام pbi121gus- مبتنی بر ناقل pbi121 طراحی و ساخته شد که فاقد ژن gus بوده و ضمن داشتن کاست کامل بیانی ژن مقاومت به کانامایسین، دارای دو جایگاه آنزیمهای برشی xbai و bamhi برای همسانهسازی ژنهای مورد نظر بین پروموتر camv 35s و ترمیناتور nos میباشد. از سازههای ساخته شده در این تحقیق میتوان برای پروژههای انتقال ژن به گیاهان مدل و زراعی برای بررسی اثرات این ژنها و تولید گیاهان تراریخته مقاوم برابر قارچها استفاده کرد. همچنین میتوان با انتقال همزمان سازههای تک ژنی یا سازه واجد هر دو ژن، روشهای مختلف انتقال توأم دو ژن را با هم مقایسه و بررسی کرد.