همسانه¬سازی ژن lysa در وکتور بیانی در راستای افزایش تولید اسیدآمینه l- لیزین
چکیده
l – لیزین یکی از اسیدهای¬آمینه ضروری است که در تغذیه انسان و دام اهمیت بسزایی دارد. این اسیدآمینه به دلیل کاربرد بسیار در صنایع دارویی و غذایی حائز اهمیت می¬باشد. تولید صنعتی لیزین از نظر اقتصادی بسیار مهم است. سالانه چندین هزار تن لیزین در جهان بوسیله corynebacterium glutamicum تولید می¬شود. روش بررسی: پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی با دو توالی برشی برای آنزیم¬های nhei و hindiii، ژن مورد نظر با روش pcr تکثیر یافت و جهت تعیین ترادف و هضم آنزیمی مناسب در وکتور ptz57r/t کلون گردید. پس از تعیین ترادف و اطمینان از صحت ژن مورد نظر، قطعه ژنی با انتهای چسبنده در وکتور بیانی pet28a کلون و در سویه e.coli bl21(de3) ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب با روش¬های هضم آنزیمی و تعیین ترادف ارزیابی شد. یافته¬ها: ژن lysa به طول kb 3/1 با توالی صحیح کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد بدین ترتیب که ژن lysa به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. همسانه سازی با استفاده از sds-page تایید شد. بحث: در این مطالعه برای اولین بار بیان ژن آنزیم دی¬آمینوپیمیلات¬دکربوکسیلاز (4.1.1.20 ec) همسانه گردید و وکتور بیانی بررسی شد.