بهبود تولید رده های سلولی پرتوان هاپلوئید از جنین های پارتنوژنتیک موش به واسطه مهار همزمان مسیرهای پیام رسانی mek و tgfβ
چکیده
هدف: در این طرح تولید سلول های بنیادی جنینی هاپلوئید پارتنوژنتیک در حضور مهارکننده های مسیرهای پیام رسانی erk و tgf-β بررسی شده است. مواد و روش ها: ابتدا بلاستوسیست های پارتنوژنتیک حاصل از فعال سازی شیمیایی اووسیت ها، در محیط r2i (حاوی pd0325901 و sb431542 که بهترتیب مسیرهای پیام رسانی erk و tgf-β را مهار می کنند) کشت شدند. سپس رده های سلول های بنیادی جنینی پارتنوژنتیک در این محیط تکثیر و نگهداری شدند. با استفاده از رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس و qrt-pcr، بیان مارکرهای پرتوانی و با روش تمایز خودبهخودی و ایجاد تراتوما پتانسیل تمایزی این سلول ها ارزیابی شدند. میزان هاپلوئیدی نیز با استفاده از روش فلوسایتومتری تعیین گردید. نتایج: در شرایط r2i، حدود 50 درصد از جنین های پارتنوژنتیک، رده سلولی تولید کردند و 10 تا 13 درصد سلول های هر رده به صورت هاپلوئیدی بودند. سلول های بنیادی پارتنوژنتیک تولید شده در محیط r2i ویژگی های سلول های بنیادی پرتوان مانند مورفولوژی، پاساژپذیری، بیان ژن های ویژه پرتوانی در سطح mrna و پروتئین را نشان دادند. همچنین این سلول ها قادر به تمایز خودبهخودی به مشتقات سه لایه زاینده جنینی و ایجاد تراتوما بودند. نتیجه گیری: مهار مسیرهای پیام رسانی erk و tgf-β می تواند شرایط مناسبی را برای تولید سلول های بنیادی هاپلوئید از جنین های پارتنوژنتیک فراهم کند.