بررسی عملکرد سلول های شبه عصبی حرکتی مشتق از بافت چربی موش صحرایی با استفاده از رنگ آمیزی کلسیم داخل سلولی و ارزیابی ترشح وزیکول های سیناپسی
چکیده
سابقه و هدف: با وجود پیشرفت های گسترده در زمینهی کشت سلول های بنیادی، هنوز انتخاب بهترین منبع سلولی کارآمد جهت تزریق، قابل تأمل است. علاوه بر این، تا کنون از نشانگر کلسیمی برای بررسی سلول های عصبی حرکتی استفاده نشده است. روش هایی که تا کنون برای بررسی عملکرد سلولی مورد استفاده قرار گرفته همچون روش های الکتروفیزیولوژی (patch-clamp)، علاوه بر سخت بودن و وقت گیر بودن، در هر بررسی فقط یک سلول را مورد بررسی قرار می دهد. در این تحقیق، نشانگر کلسیمی و ترشح وزیکول های سیناپسی در سلول های عصبی- حرکتی مشتق از بافت چربی، با استفاده از رنگ آمیزی fm1-43 و نشانگر کلسیمی fluo-2 مورد بررسی قرار گرفته است. مواد و روش ها: از موش صحرایی نر بالغ، نژاد wistar با وزن 250-200 گرم استفاده شد. بافت چربی استخراج و سلول های بنیادی آن جداگردید. سپس، سلول های به دست آمده از لحاظ مارکرهای سلول های بنیادی مزانشیمی و مولتی پوتنسی، مورد بررسی قرار گرفتند. سلول های بنیادی مشتق از بافت چربی تحت تأثیر القا کننده های رتینوئیک اسید و shh، به سلول های شبه عصبی حرکتی تمایز یافتند. بعد از تمایز، سلول های تولید شده با استفاده از تکنیک های ایمنوسیتوشیمی و rt-pcr مورد تأیید قرار گرفتند. در مرحله ی نهایی، فانکشنال بودن سلول ها با توانایی برقراری ارتباط عصبی-عضلانی، ترشح وزیکول های سیناپسی و تبادلات کلسیمی، مورد ارزیابی قرار گرفت که برای این کار از روش های هم کشتی، رنگ آمیزی fm1-43 و نشانگر کلسیمی fluo-2 استفاده گردید. یافته ها: سلول های عصبی- حرکتی مشتق از بافت چربی، تمام مارکرهای مزانشیمی و اختصاصی چربی را بیان می کنند و توانایی تمایز به سایر رده های سلول های مزانشیمی شامل سلول استخوانی، غضروفی و چربی را دارند. این سلول ها، بعد از تمایز به سلول عصبی- حرکتی، مارکرهای islet-1، oligo-2 و hb9 را بیان می کنند. همچنین، دارای توانایی برقراری ارتباط عصبی- عضلانی، ترشح وزیکول های سیناپسی و تبادلات کلسیمی می باشند. نتیجه گیری: نتایج بدست آمده نشان می دهد که سلول های عصبی- حرکتی مشتق از بافت چربی، توانایی برقراری ارتباط عصبی- عضلانی، ترشح وزیکول های سیناپسی و تبادلات کلسیمی را داشته و یک سلول فانکشنال می باشند.