همسانه سازی، بیان و تخلیص انتهای کربوکسیل زیرواحد c آنزیم اوره آز هلیکوباکتر پیلوری به منظور تولیدigy در زرده تخم مرغ

حسین بصیری، hossein basiri islamic azad university, science and research campus, tehran, iranدانشگاه آزاداسلامی واحد علوم و تحقیقات سیدلطیف موسوی گرگری، seyed latif mousavi gargari shahed university, tehran, iranدانشگاه شاهد ایرج رسولی، iraj rasuli shahed university, tehran, iranدانشگاه شاهد کاظم پریور، kazem parivar islamic azad university, science and research campus, tehran, iranدانشگاه آزاداسلامی واحد علوم و تحقیقات طاهر نژادستاری، taher nejad satari islamic azad university, science and research campus, tehran, iranدانشگاه آزاداسلامی واحد علوم وتحقیقات

چکیده

سابقه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری (h.pylori) نوعی باکتری گرم منفی اسپیرال و میکروآیروفیل است که در لایه مخاطی معده انسان تکثیر و ایجاد عفونت می نماید. رویکردهای جدید در جهت بکارگیری درمان های اختصاصی نظیر ایمنوتراپی برای ریشه کنی این عفونت میباشند. آنزیم اوره آز یکی از مهمترین عوامل بیماری زا و آنتی ژنیک این باکتری است. روش بررسی: دراین مطالعه تجربی، ابتدا بخش انتهای کربوکسیل زیر واحد c اوره آز، پس از تخلیص ژنوم باکتری، با کمک واکنش زنجیره پلیمراز (pcr) تکثیر شده و محصول روی ناقل بیانی pet28a کلون شد. پروتئین نوترکیب پس از تراریخت سازه نوترکیب به باکتری e.coli سوش bl21de3 بیان شد و نتایج با استفاده از sds-page تحلیل و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون ni-nta تخلیص شد. پروتئین نوترکیب تخلیص شده، به مرغ لگهورن سفید تزریق و igy با روش استون/کلروفرم تخلیص و با روش elisa و sds-page مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: با تعیین توالی سازه نوترکیب، صحت انجام همسانه سازی تأیید شد. بررسی با sds-page نشان داد پروتئین نوترکیب rurecc به خوبی بیان و تخلیص شده است. همچنین نتایج الایزا ایمن زایی بالای این پروتئین نوترکیب را نشان داد. نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب rurecc هلیکوباکتر پیلوری در e.coli به عنوان سلول میزبان، امکان دسترسی آسان به آنتی-ژن را فراهم کرد. علیرغم کوچک بودن آنتی ژن نوترکیب، توانایی ایمنی زایی آن شبیه به کل زیر واحد c اوره آز است