مقاله

کلونینگ و بیان پروتئین فاکتور رشد جفتی-۱ انسانی (hplgf-۱) در سیستم بیانی rosetta e.coli

نرگس اربابی، narges arbabi islamic azad university, science and research campus, tehran, iranدانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران مهدی بهدانی، mehdi behdani , biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iranمرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران مجید گل کار، majid golkar , pasteur institute of iran, tehran, iranانستیتو پاستور ایران سیدحمید آقایی بختیاری، seyed hamid aghaee bakhtiari , pasteur institute of iran, tehran, iranمرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران حسین خان احمدشهرضا، hossein khan ahmad shahreza pasteur institute of iran, tehran, iranانستیتو پاستورایران رضا مهدیان، reza mahdian pasteur institute of iran, tehran, iranمرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران

چکیده

سابقه و هدف: آنژیوژنزیس یا شکل گیری عروق خونی جدید در شرایط فیزیولوژیک و پاتولوژیک مهم ترین عامل رشد و تکثیر سلول ها است. پروتئین plgfیا فاکتور رشد جفتی یکی از مهم ترین پروتئین ها در تحریک آنژیوژنزیس است. در این پژوهش، ژن plgf-1 انسانی از بافت جفت جدا شده و پروتئین مورد نظر در سیستم باکتریایی بیان شد. روش بررسی: دراین مطالعه تجربی، ناحیه کد کننده ژن plgf-1 از بافت جفت انسان توسط پرایمرهای اختصاصی تکثیر شد. قطعه ژنی مورد نظر در پلاسمیدهای pet28a و pet32a کلون شد. پلاسمیدهای نوترکیب pet28a-plgf-1 و pet32a-plgf-1 به باکتری e.coli rosetta منتقل شدند و بیان پروتئین نوترکیب توسطiptg القاء گردید. بیان پروتئین نوترکیب و محلولیت آن با sds-page بررسی و با روش وسترن بلاتینگ هویت آن تائید شد. یافته ها: مراحل طراحی و ساخت سازه ژنی pet28a-plgf-1 و pet32a-plgf-1 با موفقیت انجام و توالی ژن plgf-1 تأیید گردید. باکتریهای القاء شده با iptg پروتئین plgf-1 را بیان کردند و توسط وسترن بلاتینگ به تایید رسید. همچنین پروتئین نوترکیب plgf-1 تقریبا به صورت نامحلول بیان شد. نتیجه گیری: پروتئین plgf-1 به خوبی در سیستم بیانی rosettae.coliبیان می شود و می توان از این پروتئین نوترکیب در تست-های مختلف استفاده نمود.

اسناد مشابه