کلونینگ و بیان ژن کد کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه qza۲
چکیده
لاکازها به دلیل توانایی اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی کاربردهای بیوتکنولوژیکی گوناگونی دارند. در این مطالعه سویه بومی qza2 که از خاک های ایران جدا شده است مورد استفاده قرار گرفت. این سویه بر اساس توالی srrna 16دارای بیش ترین شباهت به باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه atcc 14578 بود. ژن کد کننده آنزیم لاکاز از سویه qza2 به وسیله پرایمرهای کلونینگ تکثیر شد و سپس محصول pcr در ناقل بیانی (pet21a) کلون شد و آنالیز توالی انجام گرفت. این ژن سپس در باکتری اشریشیا کلی سویه bl21(de3) تحت کنترل فاژ t7 بیان شد. ژن مولتی کوپر اکسیداز در سویه qza2 یک قالب باز خواندن دارد که دارای 1656 نوکلئوتید بوده و 551 اسید آمینه را کد می کند و شامل 4 دمین غنی از هیستیدین متصل شونده به مس بود. توالی آمینواسیدی مولتی کوپراکسیداز سویه qza2 دارای 16% همسانی به توالی آمینو اسیدی پروتئین cotaدر باکتری باسیلوس سوبتیلیس و 57% شباهت را به توالی مولتی کوپر اکسیداز باکتری باسیلوس هالودورانس نشان داد. بیان تحت شرایط میکروآئروفیلیک به منظور دست یابی به مقادیر بیشتر پروتئین محلول انجام گرفت. بیان آنزیم با استفاده از سوبسترای معمول لاکاز abts سنجیده شد.