طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری

خدیجه فنائی، khadijeh fanayi department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات مهدی آجورلو، mehdi ajorloo human rabies vaccine labora-tory, pasteurs production and research complex, institute of iran, tehran, iran. department of virology, school of medical sciences, tarbiat mo-dares university, tehran, iran.مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران،گروه ویروس شناسی، دانشکده پزشکی سید حمیدرضا مژگانی، sayed hamid reza mozhgani department of virology, faculty of public health, tehran univer-sity of medical sciences, tehran, iran.گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران شیوا ایرانی، shiva irani department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات علیرضا غلامی، alireza gholami human rabies vaccine labora-tory, pasteurs production and research complex, institute of iran, tehran, iran.who cc for reference and research on rabies, pasteur institute of iran, tehran, iran.آزمایشگاه پژوهش و ساخت واکسن هاری انسانی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران، بخش تحقیقات و مرکز رفرانس هاری who، انستیتو پاستور ایران

چکیده

زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse transcriptase polymerase chain reaction (rt-pcr) تکثیر و در وکتور pcdna3.1(+) کلون شد. پس از هضم آنزیمی ژن از وکتور خارج و تعیین توالی شد. لکن به دلیل وجود موتانت در توالی آن، ژن مذکور به صورت وکتور نوترکیب pgh/n خریداری شد. pgh/n تکثیر و پس از هضم آنزیمی آن، ژن n مجدد در وکتور بیانی pcdna3.1(+) کلون و کلونینگ تایید شد. وکتور نوترکیب (+)/n pcdna3.1 به سلول های bsr کشت داده شده منتقل و بیان پروتیین n با روش آنتی بادی فلورسنت (fat) بررسی و تایید شد. یافته ها: تعیین توالی ژن تکثیر شده با rt-pcr وجود جهش در ژن را مشخص نمود. هضم آنزیمی و خارج شدن ژن n از وکتور pgh/n خریداری شده و وکتور نوترکیب (+)/n pcdna3.1 کلونینگ ژن n و نتایج الکتروفورز تکثیر ژن نوکلئوپروتیین را تایید کرد. کلونینگ مجدد ژن n در وکتور بیانی pcdna3.1(+) با روش هضم آنزیمی و کنترل سریع (quick check) نیز تایید و بیان پروتیین n در سلول های bsr با استفاده از پادتن اختصاصی و میکروسکوپ فلورسنت مشاهده شد. نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد پروتیین n ویروس هاری سویه pv، در سیستم بیانی یوکاریوتی pcdna3.1(+) طراحی شده کلون شده و می تواند بیان شود.