مقایسه روش های مختلف (میکروبی، آنزیمی ومولکولی) تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی در رده های سلولی انسانی و حیوانی ذخیره شده در بانک سلولی انستیتو پاستور ایران

وحید ملا کاظمی ها، vahid molla kazemiha department of microbiology, science faculty, science and research branch, islamic azad university, arak , iran.دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات اراک،اراک-ایران رضا مهدیان، reza mahdian molecular medicine group, department of biotechnology, pasteur institute of iran, tehran,iran.گروه پزشکی مولکولی،بخش بیوتکنولوژی، انستیتوپاستورایران،تهران-ایران آرش معمارنژادیان، arash memarnejadian department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran,iranگروه ویروس شناسی، بخش هپاتیت و ایدز ،انستیتوپاستورایران،تهران-ایران محمد علی شکر گزار، mohammad ali shokrgozar department of national cell bank of iran, pasteur institute of iran, tehran,iranبخش بانک سلولی،انستیتو پاستور ایران،تهران-ایران حمیدرضا مهاجرانی، hamid reza mohajerani department of microbiology, science faculty, islamic azad university, arak, iranگروه میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، اراک-ایران امیر امان زاده، amir amanzadeh department of national cell bank of iran, pasteur institute of iran,tehran,iranبخش بانک سلولی،انستیتو پاستور ایران،تهران-ایران شهرام آذری

چکیده

اهداف و سابقه: آلودگی مایکوپلاسما در کشت سلول از مشکلات جدی در تولید فرآورده های بیولوژیک محسوب می شود. هدف ما در این پژوهش انتخاب بهترین روش استاندارد به عنوان روشی سریع با حساسیت و اختصاصیت و دقت بالا برای تشخیص آلودگی مایکوپلاسما در کشت های سلولی بانک سلولی ایران می باشد. مواد و روش ها: در این پژوهش40 رده ی سلولی مشکوک به آلودگی مایکوپلاسما توسط سه روش کشت میکروبی، آنزیمی و مولکولی مورد مطالعه واقع گردیدند. ارزیابی آنزیمی به کمک کیت mycoalert انجام شد و در روش مولکولی از پرایمر یونیورسال طراحی شده بر مبنای سکانس های ثابت و مشترک موجود در srrna 16 ریبوزومی استفاده گردید. یافته ها: درصد آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت های سلولی با روش های مولکولی، آنزیمی و میکروبی به ترتیب با 5/57% و 5/52% و 40% استحصال گردید.نتایج حکایت از تایید حساسیت، ویژگی و صحت(دقت) بالای ارزیابی مولکولی واکنش های زنجیره ای پلیمراز ( pcr ) در مقایسه با دو روش آنزیمی و کشت میکروبی دارد. نتیجه گیری: سنجش pcr بر مبنای سکانس های ثابت و مشترک موجود در srrna 16 ری بوزومی، تکنیکی ارزشمند ، مفید و قابل اعتماد با حساسیت ، اختصاصیت و دقت بالا جهت شناسایی آلودگی های مایکوپلاسمایی در کشت های سلولی و سایر فرآورده های بیولوژیک می باشد. تکنیک آنزیمی mycoalert با توجه به حساسیت ،ویژگی و سرعت بالای آن در تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی (کمتر از 20 دقیقه) بعد از pcr ، می تواند جایگزین روش های کشت میکروبی و رنگ آمیزی dna فلوئوروکروم گردد.