مقاله

بهینه سازی استخراج dna ژنومی باکتریایی به روش سیلیکاژل

سمانه سعیدی، samane saeedi msc student, department of biology, islamic azad university of tonekabon branch, tonekabon, iranدانشجوی کارشناسی ارشد، گروه زیس تشناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تنکابن، تنکابن، ایران علی ناظمی، ali nazemi department of biology, islamic azad university, tonekabon branch, tonekabon, iranگروه زیس تشناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تنکابن، تنکابن، ایران مصطفی جعفرپور، mustafa jafarpour assistant professor, department of biology, islamic azad university of tonekabon branch, tonekabon, iranاستادیار، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تنکابن، تنکابن، ایران

چکیده

سابقه و هدف:در عصر حاضر، آزمایشات مولکولی گسترش بسیاری پیدا نموده است. اولین گام در موفقیت این آزمایشات استخراج صحیح اسید نوکلئیک می باشد. در این مطالعه، دستور کاری برای استخراج dna براساس سلیکا ارائه گردیده است. خالص سازی dna براساس تکنولوژی غشاء سیلیکاژل یک روش ساده و شامل سه مرحله اتصال، شستشو و بازیابی می باشد. اسیدهای نوکلئیک برخلاف پلی ساکاریدها و پروتئی نها، در حضور نمک های کائوتروپیک ( ciportoahc ) جذب سلیکا می شوند و با شستشو حذف م یگردند. پس از مرحله شستشو، اسیدهای نوکلئیک خالص سازی شده، ب هوسیله شستشو با بافر یا آب مقطر از سیلیکا جدا و بازیابی م یگردند؛ بنابراین هدف از این مطالعه معرفی یک روش استخراج dna با کیفیت بالا و ساده است. مواد و روش ها: در این مطالعه 8 نمونه باکتری شامل 3 باکتری گرم مثبت و 5 باکتری گرم منفی مورد بررسی قرار گرفت. استخراج dna تمام نمونه ها براساس سلیکا محلول انجام گردید. مقدار چگالی نوری( do ) آ نها با استفاده دستگاه بایوفتومتر سنجیده شده و برای تعیین کیفیت هر نمونه پس از استخراج، نمونه ها بر روی ژل آگارز برده شدند. جذب نوری در 280/260 mn به طور میانگین 1/29 بوده و الکتروفورز از محصولات pcr بر روی ژل آگارز 5/ 1 درصد انجام گردید. یافته ها: متوسط جذب dna در 260/280 mn از dna باکتری های گرم منفی و باکتری های گرم مثبت استخراج شده از سلول های خونی، به ترتیب 1 و 25 / 1 بود. براساس نتایج به دست آمده الکتروفورز ژل آگارز از محصولات pcr بهره وری بالایی داشت. نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان داد که این روش کاری برای باکتری های گرم منفی در مقایسه با باکتری های گرم مثبت بهره وری بیشتری دارد و روش ژل سیلیکا محلول یک روش ساده، ارزان و با کیفیت مناسب می باشد. با این حال این روش معایبی دارد که با تغییر در روش کار مانند: افزایش زمان، دفعات شستشو و تغییر در زمان اثردهی آنزی مها و ... می توان کیفیت آن را افزایش داد.

اسناد مشابه