ارزیابی اثر توالی های پپتید نشانه پلاستیدی lim۱۴ و atcpreca در هدایت پروتئین های گزارشگر فلورسنت سبز (gfp) و بتاگلوکورونیداز (gus) در گیاهان سیب زمینی تراریخت
چکیده
در این پژوهش، توالی های پپتید نشانه یک پروتئین اختصاصی بساک در گیاه lilium longiflorum cv. hinomoto به نام lim14 و یک پروتئین در گیاه آرابیداپسیس با نام atcpreca که ویژگی های توالی های نشانه کلروپلاستی را دارا هستند، به طور جداگانه به پایانه آمینی ژن های گزارشگر پروتئین فلورسنت سبز (green fluorescent protein=gfp) و بتاگلوکورونیداز (β-glucoronidase=gus) متصل شده، سازه های حاصل به واسطه اگروباکتریوم به رقم کاردال گیاه سیب زمینی (solanum tuberosum l. cv. kardal) منتقل شدند. بررسی با میکروسکوپ فلورسنت و همچنین رنگ آمیزی هیستو شیمیایی gus، نشان داد که پروتئین های نوترکیب lim14-gus و lim14-gfp به آمیلوپلاست غده و کلروپلاست سیب زمینی های تراریخت هدایت شده اند. سنجش کمّی فعالیت آنزیم gus نشان داد که میزان بیان این پروتئین در بخش های غنی از آمیلوپلاست گیاهان تراریخت سیب زمینی، در حالت حضور توالی نشانه به مراتب بیشتر از گیاهان تراریخت واجد ژن gus به تنهایی است. در این مطالعه همچنین عملکرد پپتید نشانه atcpreca، در بالادست پایانه آمینی پروتئین فلورسنت سبز بررسی شد و بیان این پروتئین در سلول های اپیدرم پیاز (allium cepa l.) نشان دهنده این بود که atcpreca-gfp به طور ویژه در پلاستیدها متمرکز شده اند. بر اساس نتایج حاصل از این بررسی، توالی های نشانه atcpreca و lim14 وظیفه پیش بینی شده را انجام داده، قابلیت هدایت پروتئین نوترکیب را به درون پلاستید دارا هستند.