ایجاد گیاه سیب زمینی مقاوم به ویروس pvx با استفاده از مکانیسم rna silencing
چکیده
یکی از عوامل اصلی کاهش محصول سیب زمینی ویروسها هستند. ویروس x سیب زمینی (potato x potexvirus: pvx) از مهمترین ویروسهای این گیاه میباشد و عمده ترین روش مبارزه با آن استفاده از ارقام مقاوم است. در این تحقیق سعی شد با بهره گیری از تکنیک rna silencing گیاهان سیب زمینی مقاوم به این ویروس تولید شود. برای اینکار ابتدا با دو همسانه سازی متوالی یک سازه سنجاقسری برای انتهای ژن p25 ویروس pvx در ناقل pfgc5941 تحت پیشبر camv 35s ساخته شد. پروتئین p25 نقش ممانعت از rna silencing را در میزبان ویروس به عهده دارد. ناقل نوترکیب حاصل پس از تایید، به آگروباکتریوم منتقل شده و قطعات برگ و میانگره سیب زمینی رقم آگریا به وسیله آگروباکتریوم سویه lba4404 تراریزش شدند. پس از کالوسزایی، جوانه زنی و ریشه زایی، گیاهان تراریخته انتخاب و تکثیر شدند. بررسی مولکولی با pcr روی dna گیاهان، با rt-pcr روی rna آنها وجود تراژن و بیان شدن آن را تایید کرد. گیاهان تراریخته تکثیر شده و در گلخانه به روش مکانیکی با pvx تلقیح شدند. نتایج elisa با آنتی بادی اختصاصی پروتئین پوششی pvx مقاومت دو لاین تراریخته را نشان داد. تایید مولکولی این دو لاین مقاوم سیب زمینی به pvx با rt-pcr روی rna گیاهان به کمک آغازگرهای ژن پروتئین پوششی ویروس انجام شد. نتیجه این تحقیق منجر به تولید دو لاین مستقل سیب زمینی مقاوم به pvx گردید که بررسی مقاومت و این همانی آنها در شرایط مزرعه بایستی انجام پذیرد و مینی تیوبرهای آنها جهت تکثیر تولید شود.