بهینهسازی کدونی و مقایسهی بیان فاکتور رشد عصبی بتا انسانی (β-ngf) بصورت نوترکیب در میزبانهای باکتریایی( bl۲۱(de۳ و bl۲۱(de۳)plyss
چکیده
فاکتور رشد عصبی بتا (β-ngf) برای اولین بار بدلیل نقش حیاتی اش در رشد و بقای سلول‌های عصبی مورد مطالعه قرار گرفت. این پروتئین که به خانواده ی نوروتروفین ها تعلق دارد در درمان بیماری های تخریب عصبی نظیر آلزایمر دارای نقش قابل ملاحظهای میباشد. بدین منظور، β-ngf انسانی نوترکیب برای اولینبار در ایران در دو سویهی متفاوت باکتری e.coli بیان شد. از آنجاییکه β-ngf در ساختار فعال و عملکردی خود دارای سه پیوند دیسولفیدی است، محیط احیا کنندهی سیتوپلاسم e.coli برای بیان آن مناسب نمی باشد. بنابراین، محیط اکسید کننده ی پریپلاسم جهت تولید β-ngf همراه با تاخوردگی صحیح مورد توجه قرار گرفت. در این تحقیق، cdna β-ngfانسانی بدست آمده از بانک اطلاعاتی ncbi پس از بهینه سازی کدونی و ساب کلونینگ در وکتور pet39b(+)، حاوی ژن دی سولفید ایزومراز a، به روش ترنسفورماسیون (شوک حرارتی) به سویه های bl21(de3)plyss و bl21(de3) انتقال یافت. بیان همزمان با استفاده از القای پروموتر با غلظت 1 میلی مولار iptg صورت گرفت. سپس، محتوای پروتئینی استخراج شده از دو سویهی مذکور با استفاده از تکنیک های sds-page و دات بلات با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج نشان دهنده بیان، بویژه در سویه باکتریایی bl21(de3) می باشد.