نقش یک بلاکر کانال های کلسیمی وابسته به ولتاژ بر مهار آپوپتوزیس نورون های حسی گانگلیون های کشت شده ریشه پشتی نخاع رت بالغ
چکیده
مقدمه: تحت شرایط پاتولوژیک، غلظت داخل سلولی کلسیم بطور غیر طبیعی افزایش یافته و منجر به مرگ سلولی می شود. در این پژوهش بلاکر کانال های کلسیمی وابسته به ولتاژ مورد استفاده قرار گرفت تا نقش آن در آپوپتوزیس نورون های حسی گانگلیون های کشت شده ریشه پشتی نخاع رت بالغ مورد بررسی قرار گیرد. روش ها: گانگلیون های l5 از گانگلیون ریشه پشتی نخاع رت های بالغ خارج و به سه گروه تقسیم شدند: 1- گانگلیون های لحظه زمانی صفر که بلافاصله فیکس شدند، 2- گانگلیون های کنترل 3- گانگلیون های تیمار شده با لوپرامید هیدروکلراید (200 میکرومولار). گروه های کنترل و تیمار برای لحظه های زمانی 72 ساعت در محیط کشت انکوبه و سپس فیکس شدند. کلیه گانگلیون های فیکس شده با استفاده cryostat برش گیری شدند. برای مطالعه مورفولوژیکی و بیوشیمیایی آپوپتوزیس نورون های حسی، به ترتیب از رنگ آمیزی فلئورسنت (پروپیدیوم آیوداید و هوخست 33342) و تکنیک تانل استفاده شد. آنالیز آماری داده ها از طریق آنالیز واریانس یک طرفه (anova) و آزمون tukey صورت گرفت. یافته ها: نورون های حسی گانگلیون های کشت شده برای 72 ساعت، مشخصات مورفولوژیکی آپوپتوزیس شامل چروکیدگی سیتوپلاسم، تراکم هسته و متراکم شدن کروماتین را نمایان ساختند. علاوه بر آن، اکثر نورون های حسی به صورت تانل مثبت ظاهر شدند. در این زمان کاربرد بلاکر کانال های کلسیمی وابسته به ولتاژ (لوپرامید هیدروکلراید، 200 میکرومولار) نه تنها توانست مشخصات مورفولوژیکی و بیوشیمیایی آپوپتوزیس را در نورون های حسی گانگلیون های کشت شده مهار نماید، بلکه توانست میانگین قطر هسته این نورون ها را بطور معنی داری نسبت به گروه کنترل افزایش دهد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه بیانگر آن بود که افزایش کلسیم داخل سلولی احتمالا یکی از دلایل آپوپتوزیس نورون های حسی در گانگلیون های کشت شده ریشه پشتی نخاع می باشد.