اثر فلاونوئید تام موجود در عصاره متانولی برگ کاسنی بر القای تمایز سلول های بنیادی ۱۹p به سلول های انسولین ساز
چکیده
سابقه و هدف: با توجه به نقش مؤثر فلاونوئیدهای گیاهی در پیشگیری و درمان دیابت قندی، در این پژوهش القای تمایز سلول های بنیادی 19p به سلول های انسولین ساز تحت تأثیر فلاونوئید تام عصاره متانولی برگ کاسنی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: ابتدا عصاره متانولی از فلاونوئیدهای برگ گیاه کاسنی تهیه و سپس تعیین غلظت شد. اجسام شبه جنینی (embryoid bodies یا eb) حاصل از کشت معلق سلول های 19p در محیط کشت α-mem حاوی 15 درصد سرم جنین گاو به مدت سه روز کشت داده شدند. به منظور القای تمایز این سلول ها، به مدت 12 روز با غلظت های 50، 100 و 200 میکروگرم بر میلی لیتر فلاونوئید تام عصاره متانولی برگ کاسنی تیمار شدند. سلول های 19p و اجسام شبه جنینی تیمار نشده به عنوان شاهد در نظر گرفته شد. از تکنیک های رنگ آمیزی دیتیزون (dithizone یا dtz)، ایمنوفلورسنس و rt-pcr (real-time polymerase chain reaction) جهت شناسایی سلول های تمایز یافته استفاده شد. یافته ها: سلول های 19p تمایز یافته با غلظت های مختلف عصاره نسبت به رنگ آمیزی دیتیزون پاسخ مثبت دادند. بیشترین درصد سلول های دیتیزون مثبت در غلظت 100 میکروگرم بر میلی لیتر عصاره حاصل شد. روش ایمنوفلورسنس نشان داد که سلول های 19p تمایز یافته قادر به بیان نشانگرهای اختصاصی سلول های بتای پانکراس هستند. بیان ژن pdx-1 (pancreatic duodenal homeobox-1) در این سلول ها توسط تکنیک rt-pcr به اثبات رسید. استنتاج: فلاونوئید تام عصاره متانولی برگ کاسنی قادر به القای تمایز سلول های بنیادی 19p به سلول های انسولین ساز است.