شناسایی گونه های آسپرژیلوس مهم بیماری زا با استفاده از پلی مورفیسم اشکال کانفورماسیونی تک رشته های dna ژن کد کننده rrna
چکیده
تاریخ دریافت 28/5/87 تاریخ پذیرش 1/7/88 چکیده پیش زمینه و هدف: تست مولکولی sscp [1] روشی بر پایه pcr است که بهعنوان یکی از شیوههای سریع شناسایی قارچها مورد علاقه قرار گرفته است. این فن در گذشته برای اهدافی غیر از شناسایی میکروارگانیزمها، از جمله در آنالیز موتاسیونها مورد استفاده قرار گرفته است، بعدها در شناسایی و تفکیک بین گونهای برخی اورگانیزمها کاربرد پیدا کرد. با توجه به قابلیت روش فوق در تعیین اختلافات بین ترادفهای ژنی از طریق پلی مورفیسم تک رشتههای dna بدست آمده از محصولات pcr ، در این مطالعه سعی شده است که امکان استفاده از این روش که بینیاز از هضم با آنزیمهای محدودساز میباشد در ایجاد افتراق بین گونهها بررسی شود. مواد و روش کار: 205 ایزوله آسپرژیلوسی در این مطالعه از نمونههای بالینی و محیطی چند بیمارستان آموزشی کشور و نمونههای بالینی بیماران مراجعه کننده به مرکز قارچ شناسی بدست آمده بودند، مورد بررسی قرار گرفتند. این تعداد با توجه به شیوع یک درصدی عفونتهای آسپرژیلوسی در میان عفونتهای قارچی بیمارستانی انتخاب شدند. تمامی جدایههای آسپرژیلوسی، در محیطهای کشت افتراقی آسپرژیلوسها شامل: cya , cya20s, mea و cza کشت داده شده، با استفاده ازخصوصیات کلنی و جلوههای میکروسکوپی شناسایی شدند. در روش مولکولی استخراج dna ب ه روش دستی گلاس بید و فنل - کلروفرم، آمپلیفیکاسیون قطعه its2 و دناتوراسیون dna برای تولید تک رشته انجام گرفت، سپس با استفاده از [2] g- page و عکسبرداری از باندها الگوهای تفکیکی مقایسه شدند. یافتهها: در طول یک مطالعه 18 ماهه، 205 ایزوله آسپرژیلوسی شامل یازده گونه بدست آمد، منابع جداسازی گونهها، نمونههای محیطی و بالینی بیمارستانی بودند. ایزولههای آسپرژیلوسی 25 درصد از منابع بالینی و 75 درصد از نمونههای محیطی بیمارستانها بدست آمدند. در بررسی sscp که نتیجه آن افتراق بین گونههای آسپرژیلوس بود. آسپرژیلوس نیدولانس، آسپرژیلوس فیشری، آسپرژیلوس کوادریسینکتا، (آسپرژیلوس فومیگاتوس و آسپرژیلوس نایجر) در یک گروه، (آسپرژیلوس فلاوس، آسپرژیلوس ترئوس، آسپرژیلوس اوکراسئوس) در گروه دیگر از هم قابل تفکیک هستند. بحث و نتیجهگیری: sscp بهعنوان یک روش سریع، کم هزینه و آسان میتواند برای شناسایی مهمترین گونههای آسپرژیلوس بیماریزای انسان مورد استفاده قرار گیرد، هر چند که بهدلیل ویژگی پایین روش احتمالا در کاربرد وسیع آن در آزمایشگاههای روتین تردید وجود دارد. کلید واژهها: آسپرژیلوس، شناسایی، پلی مورفیسم مجله پزشکی ارومیه، دوره بیستم، شماره سوم، ص 171-164 ، پاییز 1388 آدرس مکاتبه: ارومیه، پردیس نازلو، دانشکده پزشکی، تلفن: 2770969-0441، همراه: 09124464972 email: kadiba@umsu.ac.ir [1] single stand conformational polymorphism [2] gradient poly acryl amide electrophoresis