ساخت ناقل بیانی حاوی ژن vp۱ ویروس تب برفکی سویه fmdv type o/irn/۱/۲۰۰۷) o) تأیید پروتئین تولید شده در سلول‏های کلیه بچه هامستر (bhkt۷) و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل موشی

farahnaz motamedi sedeh، ph.d. student, department of virology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran hooreih soleimanjahi، associated professor, department of virology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran amirreza jalilian، associated professor, department of nuclear medicine, nuclear agriculture department, nuclear science and technology research institute, tehran iran homayoon mahravani، head of fmd department/ razi vaccine and serum research institute

چکیده

هدف: هدف ساخت ناقل بیانی حاوی ژن vp1 ویروس تب برفکی سویه o جداسازی شده در ایران، بیان پروتئین و ارزیابی پاسخ‏های ایمنی در موش است. مواد و روش‏ها: سویه ویروس تب برفکی o از گوساله‏ای در شهر ری در سال 1386 جداسازی، سروتایپ و ژن vp1 این ویروس در ناقل ptz57r/t و ناقل بیانی pcdna3.1+ الحاق شد. برای بررسی بیان پروتئین، ژن vp1 بدون کدون خاتمه در ناقل pegfp-n1 بالادست ژن gfp کلون شد. ناقل‏های pegfp-n1-vp1 و pcdna3.1+-vp1 در رده سلولی کلیه بچه هامستر ترانسفکت و بیان پروتئین الحاقی gfp-vp1 با میکروسکوپ معکوس فلوئورسنت و بیان پروتئینvp1 به روش الکتروفورز عمودی پروتئین‏ها و لکه‏گذاری وسترن تأیید شد. ناقل بیانی pcdna3.1+-vp1 به‏عنوان dna واکسن به موش‏ها تلقیح و پاسخ آنتی‏سرم خنثی کننده (snt) و قدرت تکثیر لنفوسیت‏های(t (si در این حیوانات اندازه‏گیری شد. نتایج: هضم آنزیمی ناقل‏های کلون شده با ژن vp1، ورود این ژن در سه ناقل را تأیید و بیان پروتئین vp1 در ناقل بیانی pcdna3.1+ به روش لکه‏گذاری وسترن با مشاهده باند اختصاصی پروتئین هدف کاملاً تأیید شد. وجود لکه‏های سبز نیز بیان پروتئین الحاقی vp1-gfp را تأیید نمود. مقادیر snt و si در گروه موش‏های تلقیح شده با dna واکسن نسبت به گروه‏های کنترل دارای افزایش معنی‏داری بود. نتیجه‏گیری: این ژن با موفقیت تکثیر، کلون و بیان شد. با توجه به تأیید بیان پروتئین vp1 و افزایش معنی‏دار snt و si از ناقل pcdna3.1+-vp1 به‏عنوان dna واکسن استفاده شد و پاسخ‏های ایمنی در مدل موشی ارزیابی شد.