مقاله

راه‏اندازی یک روش جدید سریع و حساس nested pcr یک مرحله‏ای-یک لوله‏ای در سیستم بسته با استفاده از دو آغازگر متصل به هم برای تشخیص ویروس hcv

shahab falahi، m.sc. student, department of medical virology, faculty of medical science, studental research committee, tarbiat modares university, tehran, iran mehrdad ravanshad، assistant professor, department of medical virology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran azra kenar koohi، m.sc. student, department of medical virology, faculty of medical science, studental research committee, tarbiat modares university, tehran, iran

چکیده

هدف: واکنش زنجیر پلیمراز یکی از مهم‏ترین پیشرفت‏ها در زمینه زیست‏شناسی و تشخیص مولکولی است. با وجود سادگی در مفهوم این روش نیازمند کنش‏های پیچیده بین توالی هدف، آغازگرها، dntp و آنزیم پلیمراز به‏منظور تکثیر و تشخیص موفق است. شناسایی ویروس‏های rna دار نیازمند استفاده از روش‏هایی با حساسیت و ویژگی بالا است، بنابراین تکثیر براساس روش nested pcr تا حدی منجر به بهبود حساسیت شده و از سوی دیگر، یک مرحله‏ای کردن روش مذکور باعث کاهش آلودگی‏های احتمالی خواهد شد. هدف از مطالعه حاضر راه‏اندازی و به‏کارگیری روش جدید، سریع و حساس nested pcr یک مرحله‏ای- یک لوله‏ای در سیستم بسته با استفاده از دو آغازگر به هم چسبیده است. مواد و روش‏ها: در این مطالعه، روش جدید و ویژه‏ای از طراحی آغازگر به‏منظور یک مرحله‏ای- یک لوله‏ای کردن واکنش استفاده شد. روش طراحی شده پس از راه‏اندازی و بهینه‏سازی، روی نمونه‏های کنترل مثبت و منفی ارزیابی شد. نتایج: روش راه‏اندازی شده، روی50 نمونه مثبت ویروس هپاتیت c، 10 کنترل منفی ژنوم انسانی و 5 نمونه از هرکدام از ویروس‏های هپاتیت b، نقص ایمنی اکتسابی انسان، هپاتیت g و تورکوتنو انجام گردید. براساس نتایج به‏دست آمده از مجموع آزمایشات میزان حساسیت و ویژگی روش طراحی شده، محاسبه شد. در 48 مورد از 50 نمونه مثبت باند مورد انتظار مشاهده گردید و در هیچ‏یک از نمونه‏های کنترل منفی باندی مشاهده نشد. نتیجه‏گیری: براساس سیستم ویژه طراحی آغازگر که در مطالعه حاضر استفاده شد، آغازگرهای داخلی به‏صورت مکمل حالت معمول pcr و چسبیده به آغازگرهای خارجی ساخته می‏شوند. احتمال اتصال آغازگرهای خارجی و داخلی به الگوهای نادرست در هر دو دور واکنش غیرممکن می‏شود و در نتیجه باندهای غیراختصاصی تولید نخواهد شد. برتری دیگر روش طراحی شده عدم وجود آلودگی به دلیل یک مرحله‏ای شدن و علاوه بر آن؛ کوتاه‏تر شدن زمان واکنش و نیز کاهش هزینه‏ها است.

اسناد مشابه