طراحی و ساخت ناقل خاموش‏گر rna تداخل‏گر (rnai) نسل دوم برای بررسی کاهش بیان ژن کمک فعال‏کننده rna گیرنده استروئیدی (sra)

mehdi forouzandeh، department of medical biotechnology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran saeedeh askarian، department of medical biotechnology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran

چکیده

هدف: روش تداخل rna یا rnai بهترین روش خاموش کردن ژن‏ها در سطح ترانس‏کریپتومی شناخته شده است، سرطان‏ها و بیماری‏های ژنتیکی اهداف مهمی برای توسعه روش‏های درمانی مبتنی بر rnai به‏شمار می‏روند. برای حل مشکل خاموشی موقتی سیستم‏های sirna، rna‏های سنجاق سری یا shrna‏ها ابداع شدند و نسل جدید shrna‏ها به نام shrnamir است. سازه خاموش‏گر با ساختار سنجاق سری شبه microrna (shrnamir)، رفتاری مشابه یک microrna طبیعی را درون سلول تقلید می‏کند. کمک فعال‏کننده گیرنده استروئیدی (sra) یکی از تنظیم‏کننده‏های گیرنده استروئیدی از جمله گیرنده استروژنی (er) است. بافت‏های پروستات، رحم و سینه بیان پایینی از sra دارند، در حالی‏که طی تومورزایی آن‏ها بیان sra افزایش می‏یابد، بنابراین امکان شرکت sra در تومورزایی یا پیشروی توموری وجود دارد. مواد و روش‏ها: در مطالعه حاضر از روش rna تداخل‏گر یا rnai برای خاموش نمودن ژن sra استفاده شد و سازه خاموش‏گر sra طراحی و توسط soe-pcr ساخته شد و سپس در پلاسمید pegfpc1 که یک ناقل بیانی است کلون گردید. رده سلولی انسانی سرطان پستان (mcf7) با پلاسمید حاصل ترانسفکت شد و بیان sra در زمان‏های 24، 72 ساعت و 10روز بعد با real-time pcr بررسی شد. نتایج: کاهش 60 درصدی در بیان نسبی sra در تیمارهای 72 ساعت و 10روز بعد مشاهده شد که نشان می‏دهد shrnamir-sra با موفقیت توانسته است بیان ژن هدف مطالعه حاضر را به‏طور نسبتاً پایداری خاموش کند. نتیجه‏گیری: با توجه به موفقیت در طراحی و ساخت یک سازه shrnamir و خاموشی نسبتاً پایدار ژن هدف، این سازه برای مطالعات مختلفی در آینده آماده و مناسب به‏نظر می‏رسد.