افزایش بیان پیش ساز پلی پپتید آمیلوئیدی جزیره ای انسانی در سلول های cho و بررسی ویژگی های تجمعی آن: مدل کشت سلولی تجمع پروتئین در سلول های پستانداران
چکیده
هدف: به منظور مطالعه مکانیسم های دخیل در فرایند تشکیل آمیلوئیدها، مدل کشت سلولی تجمع پروتئین آمیلین ابداع و ویژگی های آن بررسی شد. مواد و روش ها: فیبریل های آمیلوئیدی از سلول های cho استخراج شد و تمایل اتصال آن ها به رنگ تیوفلاوین t و قرمز کونگو بررسی شد. انکسار مضاعف سبز- زرد فیبریل های استخراج شده تحت نور پلاریزه مورد بررسی قرار گرفت. به منظور بررسی بهتر تشکیل آمیلوئید در سلول های cho، پروتئین آمیلوئیدزایی در این سلول ها بیش بیان شد. بدین منظور توالی ژن proiapp به کمک pcr تکثیر و در ناقل بیانی egfp-n1 ساب کلون شد. سلول های cho با ناقل egfp-n1–proiapp و ناقل egfp-n1 به عنوان شاهد، ترانسفکت شدند. فنوتیپ حدود 100 سلول ترانسفکت شده در روز های مختلف پس از ترانسفکشن به وسیله میکروسکوپ فلورسنت ارزیابی شد. وجود ساختارهای آمیلوئیدی در این سلول ها به وسیله رنگ آمیزی قرمز کونگو در زیر نور پلاریزه بررسی شد. آزمون حیات سلول به کمک رنگ آمیزی تریپان بلو روی این سلول ها انجام گرفت. نتایج: به طور طبیعی ساختار های آمیلوئیدی در مقدار کم، در سلول های cho وجود داشت. به علاوه سلول های ترانسفکت شده با proiapp-egfp فنوتیپ تجمع را نشان می دادند که این فنوتیپ در ریخت شناسی های گرد به مراتب بیشتر از نوع بیضوی بود. نتیجه گیری: فیبریل های آمیلوئیدی در سلول های cho به مقدار کم وجود دارند. پروتئین آمیلین با بیان افزایش یافته در سلول های cho ایجاد فنوتیپ تجمع می نماید که از آن می توان به عنوان مدل کشت سلولی تجمع پروتئین استفاده کرد. ویژگی های آمیلوئیدزایی این پروتئین می تواند به طور گسترده ای ما را در مطالعه مکانیسم های درگیر در فرایند تشکیل آمیلوئیدها در پستانداران از جمله انسان یاری نماید.