کلون سازی، تعیین ترادف و بیان ژن core ویروس هپاتیت c جدا شده از یک بیمار ایرانی مبتلا به هپاتیت مزمن

nasrin rastgoo، m.sc. in medical biotechnology, tarbiat modares university, tehran, iran. ali karami، ph.d. in biotechnology, associate professor, bagyatallah university, tehran, iran. farzaneh sabahi، ph.d. in virology, associate professor, tarbiat modares university, tehran, iran

چکیده

مقدمه: ویروس هپاتیت c یکی از مهمترین عوامل ایجادکننده هپاتیت حاد ومزمن، سیروز و سرطان کبد در سطح جهان محسوب می شود. به دلیل روند رو به رشد ابتلا به hcv در سطح دنیا تحقیقات گسترد ه ای در نقاط مختلف جهان برای افزایش کیفیت روشهای تشخیصی و تعیین ژنوتیپ ویروس در حال انجام است. روشها: در این تحقیق ناحیه ژنی مربوط به پروتئین نوکلئوکپسید ویروس (ژن core) که یک ناحیه بسیار حفاظت شده درطول ژنوم ویروس است، از سرم یک بیمار ایرانی با روش rt-pcr جدا شده و پس از کلون سازی در وکتور 18 puc با پرایمر های یونیورسال تعیین ترادف شد. به منظور تولید پروتئین نوترکیب coreژن تعیین ترادف شده در وکتور بیانی a 28 pet کلون شد و پلاسمید نوترکیب حاصل به باکتری (3 de) 21 bl منتقل گردید. نتایج و بحث: نتیجه تعیین ترادف نشان داد که ژن core جداشده از یک بیمار ایرانی 96 درصد شباهت با سویه a1 و 95 درصد شباهت با سویه b1 ویروس هپاتیت c دارد. این نتیجه با نتایج سایر تحقیقات انجام شده در این زمینه مطابقت دارد. وجود باند 5/23کیلودالتون در ژل sds-pageو تست وسترن بلات با آنتی بادیهای مونوکلونال بیان پروتئین core را اثبات نمود. با تولید انبوه این پروتئین، می توان از آن برای استفاده در کیتهای تشخیصی بهره جست.