کلون بیان پروتئین سطحی ۳۱ کیلودالتونی بروسلا ملی تنسیس در اشریشیاکلی
چکیده
زمینه و اهداف: بروسلوز بیماری مشترک بین انسان و دام است که از لحاظ اقتصادی و بهداشتی دارای اهمیت می باشد. پیشگیری از موارد جدید بیماری در انسان و دام برای ریشه کنی بروسلوز لازم و ضروری است.از مهمترین روش های پیشگیری استفاده از یک واکسن موثر و کم ضرر است. برای این منظور باید اقدام به شناسایی و ارزیابی ایمونولوژیکی انتی ژن های مختلف سلول بروسلا نمود. هدف از این تحقیق کلون و بیان پروتئین سطحی 31 کیلودالتونی بروسلا ملی تنسیس می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه ژن پروتئین سطحی 31 کیلو دالتونی بروسلا ملی تنسیس کلون بیان شد. ابتدا ژن مورد نظر با پرایمر های اختصاصی و انزیم پرایمر استار تکثیر و در وکتور pjet1/2 کلون شد. قطعه هدف از وکتور تایید شده بوسیله انزیم های محدود الاثر طراحی شده روی پرایمر ها خارج و در وکتور (+) pet28a ساب کلون گردید.پلاسمید حاوی ژن هدف، پس از تایید در اشرشیاکلی بی ال 21(دی ای 3) ترانسفورم و تولید پروتئین نوترکیب با ای پی تی جی 1 میلی مولار القا شد. یافته ها: این ژن حاوی 329 اسید امینه بود و محصول pcr نیز 1008 کیلو دالتون بود که نتایج اس دی اس – پیچ و وسترن بلات نشان دهنده صحت کلونینیگ و بیان پروتئین مورد نظر می باشد. و وسترن بلات نشان دهنده صحت کلونیتیگ و بیان پروتئین مورد نظر می باشد. نتیجه گیری: با تلخیص نوترکیب حاصل و ارزیابی ایمنی زایی ان می توان از ان به عنوان یک کاندید واکسن استفاده نمود.