طراحی و ساخت bcg نوترکیب حاوی ژن سیتوزین دآمیناز به منظور ارتقا کارایی bcg اینتراوزیکال در درمان سرطان مثانه

آیدا فیض برازنده، aida feiz barazandeh faculty of science, shahid beheshti university, tehran, iranگروه میکروبیولوژی دانشکده زیست شناسی دانشگاه شهید بهشتی حسین خان احمد، hossein khanahmad bcg department, pasteur institute of iranبخش تحقیقات bcg، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران غلامحسین ابراهیمی پور، gholamhossein ebrahimipour faculty of science, shahid beheshti university, tehran, iranگروه میکروبیولوژی دانشکده زیست شناسی دانشگاه شهید بهشتی محمد ابوالحسنی، mohhamad abolhassani bcg department, pasteur institute of iranبخش تحقیقات bcg، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران حسام الدین موثق، hesamadin movassagh bcg department, pasteur institute of iranبخش تحقیقات bcg، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران طیبه سهرابی، tayebeh sohrabi bcg department, pasteur institute of iranبخش تحقیقات bcg، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران

چکیده

زمینه و اهداف: سرطان مثانه دومین سرطان شایع دستگاه ادراری- تناسلی در جهان است. ایمونوتراپی با bcg درمان انتخابی این سرطان می باشد. روش دیگر، ژن درمانی سرطان مثانه با سیستم (cytosine deaminase/5-fluorocytosine (cd/5-fc است. هدف از ساخت شاتل وکتور مایکوباکتریال، انتقال ژن سیتوزین دآمیناز (cd) به bcg با روش الکتروپوریشن بود تا با تبدیل 5-fc به 5-fluorouracil)5-fu) توسط آنزیم cd، سلول های توموری بیشتری نابود شوند. روش بررسی: قطعات ژنی شاتل وکتور مایکوباکتریال شامل، پروموتر hsp60، توالی سیگنال آلفا آنتی ژن و ژن cd مخمر (saccharomyces cerevisiae) پس از تکثیر با pcr و هضم آنزیمی و با استفاده از فناوری های کلونینگ در پلاسمید pbtggt و pvn2 به ترتیب کلون و ساب کلون شدند. پلاسمید نهایی با روش الکتروپوریشن به داخل bcg هدایت گردید و وجود آن در bcg بررسی شد. یافته ها: نتایج تعیین توالی وکتور نهایی صحت آن را تایید و وکتور phara نامگذاری شد. سلول هایی که phara را دریافت کردند پس از 17 روز روی محیط میدل بروک 7 h10 حاوی غلظت نهایی 20 mg/ml کانامایسین، کلنی تشکیل دادند. نتیجه گیری: bcg نوترکیب فوق علاوه بر فراخوانی موضعی سیستم ایمنی، با تبدیل داروی 5-fc به 5-fu توسط آنزیم cd، می تواند سلول های توموری بیشتری را نابود نماید