همسانه سازی ژن فیوژن پروتئین ویروس بیماری نیوکاسل در شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان در لاین سلولی حشره
چکیده
زمینه و هدف: ویروس بیماری نیوکاسل (new castle disease virus) از مهم ترین عوامل بیماری زا در طیور است و واکسیناسیون هم چنان به عنوان راهکاری مؤثر برای کنترل این بیماری مطرح است. فیوژن پروتئین (f) قرار گرفته روی سطح ویروس بیماری نیوکاسل، در بیماری زایی این ویروس نقش اساسی دارد و می تواند به تنهایی باعث القاء ایمنی محافظتی گردد. با این پیش زمینه، هدف ما، تولید یک سازه نوترکیب (کد کننده پروتئین f) از شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان آن در لاین سلولی حشره بود. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا ژن کامل f از سویه غیر بیماری زای لاسوتا ویروس بیماری نیوکاسل، به منظور تولید رشته dna مکمل (cdna)، با تکنیک rt-pcr فراوان سازی گردید. محصول تکثیر، در وکتور کلونینگ a/t و سپس در پلاسمید دهنده pfastbac dual همسانه سازی گردید. بعد از تأیید فرآیند کلونینگ با دو روش pcr و آنالیز هضم آنزیمی، صحت توالی با روش تعیین توالی تأیید شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژن f متعاقباً در سویه باکتریایی bac10dh تولید و سازه فوق با یک پنل اختصاصی pcr با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن f و پرایمرهای عمومی 13m مورد تأیید قرار گرفت. یافته ها: تحلیل تست های تأییدی نشان داد که سازه نوترکیب بکمیدی- بیان کننده ژن پروتئین f با توالی و چارچوب صحیح- با موفقیت ساخته شده است. نتیجه گیری: محصول این سازه نوترکیب واجد ژن f علاوه بر کاربرد مستقل در القاء ایمنی محافظتی می تواند به همراه محصول دیگر باکیولوویروس های نوترکیب- بیان کننده ژن های hn و np برای تولید ذره شبه ویروسی (virus-like particle,vlp) ویروس فوق در لاین سلولی حشره- مورد استفاده قرار گیرد.