طراحی و تولید رده» سلولی بیان کننده ِ ژن های utr’ 5 و 3ns از عامل اسهال ویروسی گاوها (bvdv) به منظور ارزیابی کارآیی روش های درمانی علیه این ویروس

اعظم مختاری، امید مددگار، محمد معصومی، محمدرضا محزونیه، آرش قلیانچی لنگرودی

چکیده

زمینه مطالعه: عامل مولد اسهال ویروسی گاو (bvdv) عامل مضرات اقتصادی، بهداشتی قابل توجهی در مزارع پرورش گاو است. به دلیل ناکارآمدی نسبی برنامه های ریشه کنی این ویروس، در سال های اخیر برای مبارزه با آن تدابیر متعدد ضد ویروسی نظیر ژن درمانی به فراوانی به کار گرفته شده است. یکی از روش های ارزیابی کیفیت این تدابیر، استفاده از این ابزارهای ضد ویروسی در رده های سلولی اختصاصی بیان کننده آن ژن از طریق القای بیان ژن توسط پلاسمید حامل یا عفونت با وکتورهای ویروسی است. هدف: این مطالعه با هدف تهیه یک رده ی سلولی بسیار بیان کننده بخشی از ژنوم bvdv برای ارزیابی کارآمدی روش های درمانی و پیشگیرانه علیه این ویروس انجام شد. روش کار: بدین منظور پس از کشت سویه استاندارد nadl از bvdv و استخراج vrna ، افزوده سازی ژن های کد کننده 'utr5 و 3ns از ژنوم این ویروس و سپس کلونینگ این قـطعـات ژنـی در پلاسمیـد لنتـی ویروسی pwpi- linker b در فرادست ژن gfp انجام شد. پس از تأیید کلونینگ، لنتی وکتور های حاوی 3bvdv- ns و 'utr5 bvdv- در سلول های t293 با استفاده از سیستم packaging نسل سوم تولید شدند. در مرحله بعد سلول های mdbk بیان کننده دائمی 'utr5 و 3ns با استفاده از عفونت با لنتی ویروس های بیان کننده 3bvdv- ns و 'utr5 bvdv- تولید گردیدند. نتایج: کارآمدی عفونت با لنتی وکتورهای حامل ترانس ژن با آزمون های مشاهده مستقیم با میکروسکوپ فلورسنت، وسترن بلاتینگ و rt-pcr بررسی و با گروه کنترل مقایسه گردید و حضور و بیان ژن های مورد نظر تأیید شد. نتیجه گیری نهایی: نتایج نشان دهنده تولید موفقیت آمیز رده ی سلولی mdbk بسیار بیان کننده این دو ژن از bvdv بود و لنتی وکتورها به دلیل بیان طولانی مدت و پایدار ژن تا چندین نسل سلولی و امکان عفونی نمودن بسیاری از رده های سلولی نسبت به سایر وکتورهای ویروسی ارجحیت دارند.