همسانه سازی پیشبر 2a11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن
چکیده
بیان موقت ژنهای بیگانه در بافتهای گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی میباشد. این روش سریع، انعطاف پذیر، ساده و در بافتهای تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2a11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجهفرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2a11 در میوه میشود. هدف از این تحقیق همسانهسازی پیشبر 2a11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج dna ژنومی از گیاه گوجهفرنگی، پیشبر 2a11 با استفاده از پرایمر اختصاصی تکثیر و در ناقل ptz57r/t همسانهسازی شد. قطعه موردنظر با دو آنزیم برشی bamhi و hindiii جدا و جایگزین پیشبر دایمی camv35s در ناقل دوگانه pbi121 گردید. پلاسمیدهای نوترکیب به روش شوک حرارتی به agrobacterium tumefaciens سویه lba4404 منتقل شدند. با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن بیان ژن gus در بافت میوه گیاهان گوجهفرنگی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل نشان داد که در مقایسه با پیشبر camv35s، 2a11 نیز با کارایی بالایی باعث بیان ژن gus در میوه گوجهفرنگی می شود. بنابراین، از این پیشبر میتوان برای بیان پروتئینهای نوترکیب در میوه گوجهفرنگی استفاده کرد.