شناسایی مورفولوژیک و مولکولی عامل بوته میری خیار در رفسنجان
چکیده
بیماری بوتهمیری خیار از جمله عوامل محدود کننده کشت خیار که باعث خسارت قابل توجهی در گلخانه های تجاری میشود. به منظور شناسایی عوامل بیماری زا، نمونه برداری و جداسازی عامل بیماری طی سال های 1388 تا 1390 از گلخانه های تجاری خیار در رفسنجان انجام شد. تعداد 23 جدایه پیتیوم با استفاده از محیط کشت انتخابی جداسازی و بیماریزایی جدایه ها روی گیاهچه های خیار ارزیابی و اثبات گردید. شناسایی بیمارگر براساس ریخت شناسی پرگنه، ویژگیهای میکروسکوپی و روش مولکولی انجام شد. بر اساس ویژگیهای میکروسکوپی گونه p. aphanidermatumشناسایی گردید. توالی نوکلئوتیدی دی ان ای ناحیه ترانوبسی شونده داخلی ریبوزومی (rdna-its) جدایه های انتخابی تعیین و به بانک ژن ارسال گردید.جستجوی تشابه با genbank-blast با استفاده از توالی ناحیه rdna-its نشان داد کهp. aphanidermatumثبت شده در بانک ژن با شماره ثبت ab355599 شبیهترین توالی (بیش از99درصد تشابه) به جدایه به دست آمده میباشد. شناسایی و ردیابی مولکولی p. aphanidermatum از بافت آلوده بر اساس تکثیر قطعه اختصاصی از ناحیه rdna-its با استفاده از آغازگراختصاصی paph54f/its2 انجام و اختصاصیت و حساسیت آغازگر بررسی شد. نتایج نشان داد که جفت آغازگر مزبور برای ردیابی بیمارگر p. aphanidermatum بسیار اختصاصی و قادر به تکثیر قطعه 200 جفت بازی میباشد. از طرفی قادر به ردیابی کمتر از fg200 از dna خالص بیمارگر در pcr معمولی می باشد. استفاده از آغازگرطراحی شده زمینه ردیابی p. aphanidermatum از بافت، آلوده را فراهم مینماید و هیچ باندی در تکثیر با dna به دست آمده از بافت خیار سالم دیده نمی شود.