ردیابی همزمان سه ویروس موزائیک معمولی، موزائیک معمولی بافت مرده ی لوبیا و موزائیک خیار با استفاده از multiplex-rt-pcr
چکیده
ویروس موزائیک معمولی لوبیا (bean common mosaic virus, bcmv)، ویروس موزائیک معمولی بافت مرده ی لوبیا (bean common mosaic necrosis virus, bcmnv) و ویروس موزائیک خیار (cucumber mosaic virus, cmv) از ویروسهای بذربرد لوبیا میباشند که به طور جدی باعث افت کمی و کیفی این محصول میشوند. بدلیل وجود گزارشهای متعدد از آلودگی مخلوط لوبیا با این سه ویروس، معرفی روشی دقیق، سریع و حساس برای ردیابی همزمان cmv، bcmv و bcmnv در گیاه لوبیا میتواند نقش مهمی را در جلوگیری از انتشار ویروس و گسترش خسارت آنها و نیز غربال گیاهان سالم داشته باشد. در پژوهش حاضر برای ردیابی همزمان bcmv، bcmnv، cmv و نیز ژن 18s rrna بعنوان کنترل داخلی، روش multiplex rt-pcr استفاده شد. برای این منظور ابتدا لوبیای آلوده به این سه ویروس توسط dac-elisa ردیابی شد. آرانآ کل استخراج و سپس cdna با استفاده از آغازگرهای تصادفی شش نوکلئوتیدی ساخته شد. واکنش پیسیآر با استفاده از آغازگرهای اختصاصی برای هر ویروس و کنترل داخلی بصورت جداگانه و یا در ترکیب با یکدیگر بطور موفقیت آمیز قادر به تکثیر قطعات در حدود 470 جفت بازی برای bcmv، حدود 500 جفت بازی برای کنترل داخلی، حدود 704 جفت بازی برای bcmnv و حدود 870 جفت بازی برای cmv گردیدند. این روش قابلیت ردیابی این سه ویروس را در 100 نانوگرم از آرانای کل دارد.