بررسی کارایی ژن‏های تنظیم کننده مسیرهای ترجمه و پس از ترجمه در بهینه‏سازی بیان فاکتور فعال‏کننده پلاسمینوژن بافتی

اعظم رحیم پور، azam rahimpour school of advanced technologies in medicine, shahidbeheshti university of medical sciences, tehran. iranدانشکده فناوری‏های نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران آزیتا نجایی، azita najaei payame noor university, tehran, iranدانشگاه پیام نور، تهران، ایران فریدون مهبودی، fereidoun mahboudi biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iranمرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

چکیده

سابقه و هدف: سلول‏های تخمدان همستر چینی (cho)پرکاربردترین سیستم میزبانی برای بیان پروتئین‏های نوترکیب می‏باشند. روش‏های متنوعی هم چون ایجاد وکتورهای بیانی بهینه و نیز میزبان‏های مهندسی شده برای افزایش میزان بیان پروتئین در این میزبان به‏کار گرفته شده‏اند. در این مطالعه روش مهندسی سلول بر پایه ژن‏های موتان غیر قابل فسفریله شونده زیر واحد آلفای فاکتور آغازی یوکاریوتی 2 (eif2α s51a) و پروتئین انتقال دهنده سرامید (cert s132a)، که به ترتیب مسیر‏های ترجمه و ترشح پروتئین را در سلول کنترل می‏کنند، به منظور ایجاد رده سلولی cho بهینه به‏کار گرفته‏ شده است. مواد و روش ها: هر یک از ژن‏های cert s132a، eif2α s51a و فاکتور فعال کننده پلاسمینوژن بافتی (t-pa) در وکتور بیانی مناسب کلون شدند. جمعیت‏های سلولی پایدار بیان‏کننده هر یک از ژن‏هایcert s132a و eif2α s51a ایجاد شده و کارایی این سلول‏ها در بیان موقتی ژن t-pa در مقایسه با سلول‏های دستورزی نشده مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: وارد شدن هر یک از ژن‏های cert s132a و eif2α s51a در ژنوم سلول میزبان از طریق انجام pcr بر dna ژنومی سلول‏های پایدار تائید شد. هم چنین در وسترن بلات باند اختصاصی مطابق با هر یک از پروتئین‏های cert s132a و eif2αs51a مشاهده شد. بیان ژن cert s132a افزایش بیان 50% را در بیان t-pa به‏دنبال داشت. در مقابل در سلول‏های پایدار شده با ژن eif2α s51a تاثیر مثبتی بر میزان بیان مشاهده نشد. نتیجه گیری: نتایج این تحقیق کارایی روش مهندسی سلول بر پایه ژن cert s132a را در ایجاد سلول cho بهینه‏شده نشان می‏دهد.