بیان، استخراج، تخلیص و بررسی ایمنی زایی سه پروتئین نوترکیبltb, thc, bont/a و مقایسه تیتر آنتی بادی تولید شده علیه آن ها در حیوان آزمایشگاهی

حکمت نکویی فرد، hekmat nekooei fard dept. of biology science, faculty of science, imam hosein university, tehran, iran1- دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، مرکز تحقیقات زیست شناسی مجتبی سعادتی، mojtaba saadati dept. of biology science, faculty of science, imam hosein university, tehran, iran1- دانشگاه جامع امام حسین (ع) تهران، مرکز تحقیقات زیست شناسی مرضیه ابراهیمی، marzieh ebrahimi dept. of stem cells and developmental biology, royan institute for stem cell biology and technology, tehran, iran2- پژوهشگاه رویان تهران، پژوهشکده سلول های بنیادی، مرکز تحقیقات علوم سلولی جهاد دانشگاهی غلامرضا اولاد، gholam reza olad applied biotechnology research center, baqiatallah university of medical sciences, tehran, iran3- دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) تهران، مرکز تحقیقات بیوتکنولوزی کاربردی فرید عزیزی جلیلیان، farid azizi jalilian dept. of microbiology, hamedan university of medical sciences, hamedan, iran4- دانشگاه علوم پزشکی همدان، گروه میکروبیولوژی جعفر سلیمیان، jafar salimian chemical injuries research center, baqiatallah university of medical science, tehran, iran5- دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) تهران، مرکز تحقیقات آسیب های شیمیایی بیژن صدیقی مقدم

چکیده

سابقه و هدف: در میان عوامل باکتریایی، شایع ترین عامل بیماری اسهال، باکتری اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک است. تزریق زیرواحد ltb توکسین آن قادر به ایجاد مصونیت شش ماهه در میزبان است. توکسین تتانوس کلستریدیوم تتانی عامل بیماری مهلک کزاز است. به وسیله واکسن توکسوئید کزاز می توان از بیماری کزاز جلوگیری نمود. این مصونیت تا 10 سال در انسان ادامه می یابد. ناحیه اتصالی توکسین کزاز (thc) بخش اصلی در ایمنی زایی این توکسین محسوب می شود. کلستریدیوم بوتولینوم عامل بیماری بوتولیسم است. تزریق واکسن توکسوئید بوتولینوم نیز مصونیت 2 ساله علیه بیماری ایجاد می کند. هدف از این مطالعه، تولید و بررسی ایمنی زاییltb, bont/a و thc در حیوان می باشد. مواد و روش ها: از سه باکتری e.coli bl21 de3 تراریخت شده با وکتور pet28a که به طور جداگانه حاوی سه ژن نوترکیب ltb, bont/a-hc و thc بودند، جهت بیان پروتئین های نوترکیب فوق استفاده شد. هر سه پروتئین مورد نظر استخراج، تخلیص و بر روی ژل sds-page بررسی گردیدند. سپس ایمنی ز ایی موش های آزمایشگاهی به وسیله این سه پروتئین صورت گرفت. تیتر آنتی بادی حاصل از پروتئین های نوترکیب با استفاده از تست الایزا و آزمون آماری دو طرفه آنووا مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفت. یافته ها: نتایج ارزیابی ژل sds-page بیان و تخلیص مناسب هر سه پروتئین را نشان داد. نتایج ایمنی زایی و تست های الایزای سرم این سه گروه ایمن شده نشان داد که تیتر آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیب thc بالاتر از پروتئین های نوترکیب ltb و bont/a است. هم چنین تفاوت معنی داری بین تیتر آنتی بادی ltb و bont/a (0001/0p value<) مشاهده گردید. نتیجه گیری: اختلاف در تیتر آنتی بادی این سه گروه ممکن است به طول عمر سلول های خاطره حاصله در این گروه ها ارتباط داشته باشد. هر چند که نتایج نیاز به مطالعات بیش تری دارد