اندازه گیری سینتیکی کوانزیم nadh به روش اسپکتروفتومتری
چکیده
با توجه به نقش مهمی که کوآنزیم nadh (-b نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید) در متابولیسم، انتقال الکترون در واکنشهای تولید انرژی و بیوسنتز در بدن موجودات زنده دارد اندازه گیری آن از اهمیت خاصی برخوردار است . در این تحقیق نتایج حاصله از بررسی و بهینه سازی یک روش سینتیکی اندازه گیری کوآنزیم nadh با استفاده از اسپکتروفتومتری ارائه می گردد. این روش براساس واکنش اکسیداسیون کوآنزیم nadh، در حضور آنزیم پراکسیداز (pod)، یونهای فعال کنده mn+2 و یک ترکیب اورگانوفلوئوراید، از نوع آروماتیک (ar-f) پایه ریزی شده است : nadh + ar-f ---->f + nad+ + product با اینکه قبلا اندازه گیری گلوکز و اثر تداخل کننده های آن، اندازه گیری لاکتات دهیدروژناز و اروه با استفاده از این واکنش ، بوسیله الکترود انتخابگر یون فلوئوراید انجام شده است [1-4] ولی واکنش فوق از طریق اسپکتروفتومتری تاکنون مورد مطالعه قرار نگرفته است ، در این بررسی بجای پیگیری تولید یونهای فلوئوراید، تغییرات جذبی کوآنزیم nadh در ?340nm از طریق سینتیکی و محاسبه سرعت اولیه دنبال شده است . هم چنین به منطور بالا بردن حساسیت این روش و بهینه سازی آن اثر پارامترهای متفاوت مانند: غلظت و نوع بافر، ph، غلظت یونهای فعال کننده، غلظت و نوع ترکیب اورگانوفلوئوراید، میازن لازم فعالیت آنزیم و دما مورد مطالعه قرار گرفته است . هم چنین محدوده خطی منحنی کالیبراسیون، تکرارپذیری در دو غلظت بالا و پایین و حد تشخیص این روش در شرایط بهینه حاصله تعیین شده است .__