پایان‌نامه

همسانه سازی و انتقال ژن tpa به گیاه توتون و آنالیز گیاهان تراریخت

اسد معصومی اصل

چکیده

بکارگیری زیست مولکولی و زیست فناوری گیاهی نشان داده است که می توان بسیاری از داروها را در حجم انبوه و به قیمت بسیار ارزان در گیاهان تولید نمود. جذابیت سیستم های گیاهی به دلیل مزایایی همچون ایمنی بالا، هزینه پائین، تغییرات پس از ترجمه و حجم بالای تولید است که نسبت به سیستم های کلاسیک (مثل باکتری ها، مخمرها و سلولهای جانوری) دارند. پروتئین داروئی (tissue plasminogen activator) tpa بطور اختصاصی و نسبتا قوی به لخته های خونی متصل شده و ترجیحا پلاسمینوژن به دام افتاده در داخل لخته ها را فعال و لخته خونی را از بین می برد. از پروتئین نوترکیب tpa به منظور درمان سکته های قلبی و مغزی استفاده می شود. در این تحقیق، به منظور بررسی امکان و نحوه بیان این پروتئین در سیستم بیانی گیاهی، cdna ژن فعال کننده پلاسمینوژن بافتی(tpa) با کمک آغازگرهای اختصاصی در ناقلt/a همسانه سازی و سپس در ناقل بیانی گیاهی pbi121 در مجاورت ژن gus همسانه سازی شد. این ژن تحت کنترل پیشبرنده camv 35s و خاتمه دهنده nos قرار گرفت. توالی افزایش دهنده kozak و ترادف رمز کننده پپتید نشانه kdel، به ترتیب به انتهاهای آمینی و کربوکسیلی ژن tpa افزوده شدند. سازه pbi-tpa ابتدا به آگروباکتریوم سوش lba4404 و سپس به ژنوم گیاهان توتون انتقال داده شد. گیاهان تراریخته روی محیط کشت انتخابگر (حاوی کانامایسینmg.l-1 100) انتخاب شدند و جوانه های تراریخت ریشه دار شده ابتدا به پرلیت و سپس به خاک منتقل شدند به منظور جلوگیری از دگرگرده افشانی غنچه قبل از باز شدن پاکت گذاری و ایزوله شدند و بذور نسل اول (t0) از آنها جمع آوری و ارزیابی پایداری ژن در نسل بعد انجام شد.. واکنش rt-pcr نیز انجام رونویسی و تولید mrna مربوطه را اثبات کرد. ژل sds-page نیز علائم اولیه و احتمالی حضور پروتئین مورد نظر(tpa) را نشان داد و از آزمون وسترن بلات جهت اطمینان از بیان پروتئین tpaاستفاده شد. آزمون زیموگرافی برای بررسی فعال بودن پروتئین تولید شده انجام شد که این آزمون هم حضور و هم فعال بودن پروتئین نوترکیب tpa را اثبات کرد. اکنون اگر بتوان این پروتئین نوترکیب را تخلیص کرد، این پروتئین داروئی توانایی حل لخته های خونی را خواهد داشت. بدیهی است با استحصال و استخراج این پروتئین نوترکیب ارزشمند علاوه بر تولید انبوه و ارزان آن، گام موثر دیگری در جهت پیشرفت داروهای نوترکیب در کشور برداشته خواهد شد.

اساتید راهنما و مشاور

مختار جلالی جوران، فریدون مهبودی، هوشنگ علیزاده

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • همسانه سازی و ارزیابی فعالیت پیشبر القایی rd۲۹a در گیاهان تراریخت توتون

    مقالهپژوهش های سلولی و ملکولی

    پیشبر rd29a به وسیله واکنش زنجیری پلیمراز (pcr) و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی از گیاه arabidopsis thaliana همسانه­سازی شد. ناقل دوگانه بیانی pbi-rd-gus با اتصال توالی rd29a به ژن gus ساخته شد. سازه اخیر به همراه pbi121 با استفاده از agrobacterium tumefaciens برای تراریختی گیا

  • همسانه سازی و انتقال ژن AtCDPK5 به توتون

    مقاله۲۰۱۶ژنتیک نوینرویا حقیقی، ولی اله محمدی، علیرضا عباسی

    تنش‌های محیطی مهم‌ترین عامل کاهش عملکرد محصولات زراعی هستند. ژن AtCDPK5 یکی از ژن‌های خانواده‌ بزرگ CDPK در گیاهان است که نقش مهمی در پاسخهای دفاعی گیاه نسبت به تنش‌های غیر زیستی دارد. هدف از این پژوهش همسانه سازی ژن AtCDPK5و انتقال آن به توتون به‌منظور افزایش تحمل به تنش‌های ...

  • همسانه سازی و انتقال آنزیم t۷rnaپلیمراز باکتریوفاژ t۷ به توتون

    مقالهمهندسی ژنتیک و ایمنی زیستیکبری نعلبندی، دانشگاه بوعلی سینا اصغر میرزایی اصل، دانشگاه بوعلی، دانشکده کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی لیلا خدایی، دانشگاه پیام نور همدان، دانشکده کشاورزی غلام خداکرمیان

  • همسانه سازی، آنالیز بیان و بررسی روابط خویشاوندی ژن dbat از گیاه سرخدار بومی ایران (taxus baccata l.)

    مقالهفصلنامه علمی پژوهشی گیاهان داروییمحمد مجیدی، m majidi department of biotechnology and plant breeding, faculty of agriculture, ferdowsi university of mashhad, mashhad, iran tel: +98 – 511 - 8796818-20, fax: +98 – 511 – 8787430مشهد، دانشگاه فردوسی مشهد، دانشکده کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی کدپستی: 9177948978، تلفن: 8796818 (0511)، نمابر: 8787430 (0511) محمد فارسی، m farsi faculty of agriculture, ferdowsi university of mashhadگروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهدسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university) احمدرضا بهرامی، ar bahrami faculty of science, ferdowsi university of mashhadگروه زیست شناسی، دانشگاه فردوسی مشهد، دانشکده کشاورزیسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه فردوسی (ferdowsi university) جواد بهروان

    مقدمه: تاکسول یکی از مهم ترین داروهای ضدسرطان می باشد که تأمین آن عمدتاً به روش های زیستی وابسته می باشد. ژن 10- داستیل باکاتین iii – اُ- استیل ترانسفراز (dbat) یکی از ژن های کلیدی مسیر بیوسنتزی تاکسول می باشد و می توان انتظار داشت افزایش بیان آن منجر به افزایش تولید تاکسول در سی

  • همسانه سازی و بیان دو پپتید ضدمیکروبی نوترکیب جدید Dermaseptin B1 در گیاه توتون برای مقابله با میکروب های بیماری زای انسانی

    مقاله۲۰۱۹مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانمیترا خادمی، فرهاد نظریان فیرزآبادی، احمد اسماعیلی

    سابقه و هدف: بیمارگرهای مقاوم به آنتی‌بیوتیک‌های رایج، یکی از مهم‌ترین چالش‌های جهانی در علوم پزشکی است. یکی از راه کارهای مناسب در این زمینه، جایگزینی پپتیدهای ضدمیکروبی قوی به جای آنتی‌بیوتیک‌ها در کنترل بیمارگرهای مهم است. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، توالی DNA کد کننده