طراحی و ساخت توالی ژنی پروتئین جاذب فلز به روش pcr بااولیگونوکلئوتیدهای هم پوشان و کلون سازی آن در باکتری اشرشیاکلی
چکیده
ساخت ژنها از سال ها پیش مورد توجه محققان مهندسی ژنتیک بوده است. مسلما با توسعه ی تکنیک های ساخت ژن های سنتتیک، به دلیل کاربرد های فراوان آنها، می توان در روند تحقیقات مولکولی سهولت ایجاد نمود. به طور کلی روش های ساخت این گونه از ژنها به دو دسته ی روش های مبتنی بر pcr و روش های فاقد pcr تقسیم بندی می شوند. در این مطالعه به دلیل اهمیت این تکنیک ها از یک طرف و اهمیت پروتئین های جاذب فلز از طرفی دیگر به انجام مطالعه پیرامون ساخت ژن سنتتیک یکی از انواع این گونه پروتئین ها پرداخته شده است. ساخت ژن کدگذار smta با استفاده از روش واکنش زنجیره ای پلیمرازی هم پوشان از اهداف مدنظر این پروژه بوده است. طراحی اولیگو نوکلئوتیدهای سازنده ی ژن، به کارگیری متد ساخت تک مرحله ای و بهینه سازی به جهت کاهش هزینه ها و افزایش سرعت روند سنتز ژن در مرحله ی اول این پروژه صورت پذیرفت. طی این امر سعی بر آنالیز اثرات عوامل مختلف بر روی ساخت ژن مورد نظر و کارآیی آن از جمله تاثیر غلظت عوامل موثر در روند سنتز بوده است که در نهایت توانسته شد ژن در کمتر از 40 دقیقه سنتز شده و یکی از روش های ساخت ژن بر اساس pcr با نام سنتز ژن تسهیل شده بهینه سازی بگردد. در نهایت نیز ژن ساخته شده به درون وکتور pbluescript ksانتقال یافت و در باکتری اشرشیاکلی کلون گشت تا رده ای ایجاد شود که بتوان از آن در مطالعات بعدی در بیان پروتئین، آنالیز ساختار و غیره مورد استفاده قرار بگیرد