بررسی جهش های ژن p53 به روش dhplc در مبتلایان به سرطان روده بزرگ
چکیده
سرطان روده بزرگ یکی از معمولیترین بدخیمی¬های موجود درکشورهای توسعه یافته است که بعنوان سومین نوع سرطان منجر به مرگ در کشورهای غربی شناخته شده است. میزان شیوع سالیانه آن در انگلستان 3500 نفر و در کل دنیا نیم میلیون نفر تخمین زده می¬شود که معادل 13% کل سرطان¬ها می باشد. سالانه حدود 55000 نفر بخاطر سرطان روده بزرگ در ایالات متحده آمریکا می¬میرند. تخمین زده شده است که هر سال 19000 و 160000 مورد جدید به ترتیب در انگلیس و آمریکا بوجود می¬آید. فعالیت tp53 در پیشبرد سلامتی و حمایت علیه پیشرفت سرطان موثر است tp53 یکی از تعدیل کننده¬های اصلی در عملکرد سلولی مانند کنترل چرخه سلولی، پیری و آپوپتوز در پاسخ به تخریب dna است و یکی از معمولی¬ترین ژن¬هایی است که در سرطان روده بزرگ دچار جهش می¬شود. در این طرح شناسایی جهش¬های ژن p53 در بیماران کرمانی مبتلا به سرطان روده بزرگ مورد توجه قرار گرفت. 49 نمونه بافت توموری و نرمال مورد نیاز( 43 بلوک پارافینه و 6 نمونه بافت تازه) از بیمارستان¬های استان کرمان جمع آوری شد. در این مرحله سعی گردید افرادی انتخاب شوند که در آن¬ها تومور به حداقل دو گره لنفی متاستاز داده باشد (مرحله iiia کارسینوما). dna نمونه¬ها بر اساس مراحل موجود در پروتکل کیت dneasy محصول شرکت کیاژن با انجام تغییراتی در بعضی مراحل استخراج شدند. اگزون¬های 8،7،5 هر نمونه با پرایمرهای اختصاصی و با استفاده از مخلوط آنزیم¬های taq و pwo پلیمراز تکثیر شده و پس از خالص سازی بوسیله کیت استخراج dna محصول شرکت (fermentas) برای تعیین توالی به شرکت آلمانی mwg operon ارسال شدند. بررسی نتایج در یکی از نمونه¬ها جهش حذف در کدون140 و 142 را نشان داد همچنین در یک نمونه توموری تغییر gat→aat در کدون 184 اگزون پنج دیده شد، از طرفی در همان بیمار تغییر در نوکلئوتید سوم کدون 295 اگزون هشت(cct→ccc) نیز مشاهده شد. دو نمونه توموری نیز دارای جهش cgg→tgg در کدون 248 اگزون هفت بودندکه یکی از نقاط داغ جهش در این ژن می¬باشد. همچنین سه نمونه بافت توموری و دو نمونه بافت نرمال ورود یک نوکلئوتید g را در اینترون 7-8 نشان دادند. علاوه بر دخول g، تغییر ccc→tcc هم در اینترون 7-8 دیده شد در حالی که بافت نرمال همان فرد هیچ یک از این تغییرات را نشان نمی¬داد.