ردیابی عوامل بیماری زنگ زرد و قهوه ای گندم و جو با استفاده از real-time pcr
چکیده
گندم غذای اصلی انسان است. مهمترین بیماری این گیاه که سالانه مقادیر زیادی از محصول را از بین می برد، بیماری زنگ غلات است. ردیابی و شناسایی سریع این بیماری قبل از بروز اپیدمی می تواند در ایجاد یک سیستم پیش آگاهی جهت کنترل به موقع و جلوگیری از خسارت بالا به محصولات مفید باشد. روشهای مرفولوژیکی جهت شناسایی این عوامل بیماری از دقت و سرعت لازم برخوردار نیستند. روش های مولکولی مرسوم نیز نیاز به مقادیر زیادی اسپور برای شناسایی این قارچ ها دارند. در این مطالعه برای بر طرف کردن این مشکل و ردیابی و شناسایی سریع سه قارچ p. striiformi، p. triticina و p. recondita از تکنیک real-time pcr استفاده گردید. پس از جمع آوری یوریدیوسپورهای این سه زنگ ابتدا شناسایی مرفولوژیکی بر روی یوریدیوسپور صورت گرفت. سپس استخراج dna از این نمونه ها انجام شد و منطقه its1 آنها توسط pcr تکثیر گردید. سپس ناحیه its1 دو قارچ p. triticina و p. recondita جهت مقایسه با توالی its1 این دو قارچ که در ژن بانک موجود است توالی یابی گردید و شباهت معنی داری بین هر کدام از این دو گونه و توالی آن در بانک ژن نشان داده شد. توالی یابی توانست با احتمال 98 درصد این دو قارچ را شناسایی کند. همچنین ناحیه s 28 به عنوان کنترل داخلی در تمام نمونه ها تکثیر گردید. نمونه های هر قdnaارچ با پروب اختصاصی آن توسط real-time pcr تشخیص داده شد. پروب ها توانستند نمونه ها را به طور اختصاصی تکثیر دهند. نتایج این مطالعات نشان داد که تکنیک real-time pcr می تواند تفکیک قارچ ها را به طور کامل انجام داده و dna زنگ ها را تا حدود 1 پیکوگرم شناسایی کند.
