جداسازی و شناسایی آنتی ژنهای سوماتیک و دفعی- ترشحی لارو استروس اویس به روشsds.page و ایمونوبلاتینگ
چکیده
استروس اویس (مگس بینی گوسفند) یکی از مهم ترین انگل ها در نشخوار کنندگان کوچک اهلی می باشد. و استروزیس زئونوز نیز محسوب می شود و چندین مورد از عفونت های تنفسی و غیر تنفسی حنجره انسان در بسیاری از نقاط جهان بوسیله این مگس مشاهده شده است. هدف از این مطالعه جداسازی و شناسایی آنتی ژن های سوماتیک و دفعی- ترشحی لارو استروس اویس با روش sds_page و ایمنوبلاتینگ می باشد. جهت انجام این مطالعه با مراجعه به کشتارگاه اهواز و علامت گذاری و خونگیری ازدام های مشکوک به بیماری، نوزادهای مرحله دوم و سوم( l2 وl3) از بینی گوسفندان کشتار شده جدا گردید و لاروها چندین بار باpbs آنتی بیوتیک دار شستشو داده شد. برای تهیه آنتی ژن های سوماتیک تعدادی لارو l2و l3در pbs همراه با dtt بصورت مجزا به وسیله سونیکاتور هموژنیزه و بعد سانتریفیوژ گردید و مایع رویی هریک فیلتر شدند. برای تهیه آنتی ژن های دفعی -ترشحی تعدادی لارو l2 و l3 را در محیط rpmi آنتی بیوتیک دار در انکوباتور همراه با co2 5 درصد برای 24 الی 48 ساعت کشت داده شد. سپس سانتریفیوژ و فیلتر گردید و در نهایت میزان پروتئین نمونه ها به روش برادفورد اندازه گیری شدند. جهت تهیه آنتی سرم و بررسی ایمنی زایی این آنتی ژن ها تعدادی خرگوش با آنتی ژن های استروس اویس ایمن شدند و از آنها خونگیری به عمل آمد. با استفاده از روش sds-pageپروفایل پروتئینی نمونه ها مشخص گردید. تعیین آنتی ژن های ایمنوژن به روش ایمنوبلاتینگ با استفاده از سرم خرگوش و گوسفند و کنژوگه های مربوطه انجام شد. در پایان این نتیجه حاصل شد که می توان از باند های 25 و 28 کیلوداالتون sl2 و باند 28 کیلوداالتون sl3 و همچنین باندهای 25 و59 کیلودالتونیesl3 ایمنوبلات خرگوش، و همچنین باند 28 کیلودالتونی el2،el3،sl2،sl3 و باند 57 کیلودالتونی sl2 ایمنوبلات گوسفندی، به عنوان قوی ترین باند ها برای ایمنی زایی استفاده کرد و یا آنها را خالص سازی کرده و جهت مطالعات تکمیلی از این باند ها بهره برد.