تراریزش برنج با ژن cryia(c) با استفاده از تفنگ ژنی توسط نانو ذرات طلا
چکیده
به منظور دستیابی به برنج تراریخته مقاوم به آفات که فاقد ژن نشانگر انتخابی باشد، پلاسمید pubc حامل ژن cry1a(c) و فاقد ژن مارکر انتخابی به همراه پلاسمید ptra132 دارای ژن مقاومت به هیگرومایسین به عنوان نشانگر انتخابی به منظور بهره گیری از روش تراریزش توأم ( co-transformation) در گیاه استفاده شدند. پلاسمیدها به کالوس های جنین زایی که از بذور رسیده منشا گرفته و دارای توان تقسیم سلولی و باززایی بالایی بودند، به روش ریزپرتابه وارد شدند. سلول های تراریخته احتمالی از بافت های بمباران شده پس از 3 دوره گزینش در محیط کالوس زاییn6 حاوی 50 میلی گرم در لیتر هیگرومایسین b شناسایی شدند. نهایتاً کالوس های مقاوم به هیگرومایسین در محیط باززایی ms حاوی50 میلی گرم در لیتر هیگرومایسین b باززا شدند. در نهایت گیاهان تراریخته احتمالی حاصل با آنالیز pcr مورد بررسی قرار گرفتند. این آنالیز نشان داد که سه گیاه تراریخته احتمالی حامل هردو ژن cry1a(c) و ژن مارکر( (hphبودند. آنالیزهای مولکولی سادرن و rt-pcr برای اثبات قطعی تراریزش و تشخیص تعداد محل های ادخال لازم است.