تولید و تخلیص نانووکتورهای ویروسی حاوی ژن نانوبادی her2 در تیتر بالا
چکیده
وکتورهای مشتق شده از ویروس hiv تیپ 1 به طور گسترده ای برای ژن درمانی مورد استفاده قرار می گیرند، این وکتورها می توانند موجب بیان پایدار ژن مورد نظر، چه در سلولهایی که تقسیم می شوند و چه در سلولهایی که توانایی تقسیم را از دست داده اند، می شوند. هر چند تولید و تخلیص این وکتورها در تیتر بالا برای استفاده در آزمایش های in vivo دشوار می باشد. یکی از روشهای معمول برای تولید وکتورهای لنتی ویروسی، ترانسفکت نمودن همزمان پلاسمیدهای ویروسی بروی سلولهای 293t با استفاده از روش کلسیم فسفات می باشد، در این روش وکتورهای ویروسی پس از گذشت زمان لازم،به صورت جوانه زدن از سلول خارج شده و در سوپرناتانت قرار می گیرند. .وکتورهای ویروسی پس از جمع آوری، تغلیظ و سپس در حجم مورد نظر الیکوت گشته و برای استفاده در زمان مناسب در دمای منفی 80 درجه سانتی گراد نگهداری می گردد.از روش هایی که برای تغلیظ و تخلیص وکتورهای لنتی ویروسی استفاده از اولتراسانتریفیوژ است که این روش برای تخلیص حجم های زیاد وکتورهای ویروسی که از آزمایش های با مقیاس بالا بدست می آید جوابگو نیست، در این تحقیق از روشی مبتنی بر پلی اتیلن گلیکول برای تغلیظ وکتورهای لنتی ویروسی استفاده شده است. از دیگر خصوصیات وکتورهای لنتی ویروسی می توان به امنیت زیستی بالاتر در مقایسه با دیگر وکتورهای ویروسی،سمیت پایین و توانایی اختصاصی نمودن ویروس برای یک رده سلولی خاص اشاره نمود.