کلونینگ و بیان ژن np ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ h9n2 در اشرشیاکلی
چکیده
خلاصه فارسی: خلاصه فارسی: آنفلوانزای پرندگان یک بیماری عفونی خطرناک و با اهمیت جهانی است که خسارات مالی قابل توجهی به صنعت طیور تحمیل می کند. ویروس آنفلوانزای پرندگان از جنس آنفلوانزاویروس a و از خانواده ارتومیکسوویریده می باشد. یک برنامه مراقبتی مناسب مانند جستجوی سرولوژیکی آنتی بادی های تولید شده بر ضد ویروس آنفلوانزای پرندگان، اهمیت زیادی در پیشگیری و کنترل آنفلوانزای پرندگان دارد. تشخیص سرمی بر اساس بررسی آنتی بادی تولید شده بر ضد نوکلئوپروتئین(np) که در میان همه ویروس های a آنفلوانزا حفاظت شده است، می تواند برای نشان دادن سطح ایمنی ضد همه تحت تیپ های ویروس a آنفلوانزا استفاده گردد. هدف از این مطالعه تولید پروتئین نوترکیب np و طراحی الیزا با آن بود. بدین منظور ناحیه کدکننده ژن نوکلئوپروتئین جدایه ای از ویروس آنفلوانزای پرندگان a/chicken/iran/ah-1/06(h9n2) با آزمایش rt-pcr تکثیر وبه درون وکتور بیانی- پروکاریوتی (pmal-c2x) کلون شده و به داخل باکتری اشرشیا کلی سویه bl21(de3)ترانسفورمه گردید. پروتئین نوترکیب mbp-npبیان شده در اشرشیا کلی با کمک ستون کروماتوگرافی رزین-آمیلوز خالص شد و به عنوان یک آنتی ژن تشخیصی به منظور طراحی یک الیزای غیرمستقیم اختصاصی تیپ براساس نوکلئوپروتئین، جهت بررسی آنتی بادی های تولید شده ویروس آنفلوانزای پرندگان در سرم ماکیان ، مورد استفاده قرار گرفت. np-elisa طراحی شده با کیت الیزای تجاری ویروس آنفلوانزای پرندگان مقایسه گردید. توافق عالی (%93) بین np-elisa و کیت الیزای تجاری مشاهده گردید (k= 0.95). نتایج نشان داد که np-elisa نسبت به کیت الیزای تجاری در تشخیص آنتی بادی در ماکیان آلوده شده با ویروس آنفلوانزای پرندگان، حساسیت بیشتری داشت اما این اختلاف معنی دار نبود. این یافته ها حاکی از آن است که الیزای غیرمستقیم طراحی شده براساس پروتئین نوترکیب np، آزمایشی حساس و اختصاصی است و می تواند در امر تشخیص و بررسی های سرواپیدمیولوژیکی به منظور پیشگیری و کنترل ویروس آنفلوانزای پرندگان در دراز مدت استفاده گردد. پرندگان یک بیماری عفونی خطرناک و با اهمیت جهانی است که خسارات مالی قابل توجهی به صنعت طیور تحمیل می کند. ویروس آنفلوانزای پرندگان از جنس آنفلوانزاویروس a و از خانواده ارتومیکسوویریده می باشد. یک برنامه مراقبتی مناسب مانند جستجوی سرولوژیکی آنتی بادی های تولید شده بر ضد ویروس آنفلوانزای پرندگان، اهمیت زیادی در پیشگیری و کنترل آنفلوانزای پرندگان دارد. تشخیص سرمی بر اساس بررسی آنتی بادی تولید شده بر ضد نوکلئوپروتئین(np) که در میان همه ویروس های a آنفلوانزا حفاظت شده است، می تواند برای نشان دادن سطح ایمنی ضد همه تحت تیپ های ویروس a آنفلوانزا استفاده گردد. هدف از این مطالعه تولید پروتئین نوترکیب np و طراحی الیزا با آن بود. بدین منظور ناحیه کدکننده ژن نوکلئوپروتئین جدایه ای از ویروس آنفلوانزای پرندگان a/chicken/iran/ah-1/06(h9n2) با آزمایش rt-pcr تکثیر وبه درون وکتور بیانی- پروکاریوتی (pmal-c2x) کلون شده و به داخل باکتری اشرشیا کلی سویه bl21(de3)ترانسفورمه گردید. پروتئین نوترکیب mbp-npبیان شده در اشرشیا کلی با کمک ستون کروماتوگرافی رزین-آمیلوز خالص شد و به عنوان یک آنتی ژن تشخیصی به منظور طراحی یک الیزای غیرمستقیم اختصاصی تیپ براساس نوکلئوپروتئین، جهت بررسی آنتی بادی های تولید شده ویروس آنفلوانزای پرندگان در سرم ماکیان ، مورد استفاده قرار گرفت. np-elisa طراحی شده با کیت الیزای تجاری ویروس آنفلوانزای پرندگان مقایسه گردید. توافق عالی (%93) بین np-elisa و کیت الیزای تجاری مشاهده گردید (k= 0.95). نتایج نشان داد که np-elisa نسبت به کیت الیزای تجاری در تشخیص آنتی بادی در ماکیان آلوده شده با ویروس آنفلوانزای پرندگان، حساسیت بیشتری داشت اما این اختلاف معنی دار نبود. این یافته ها حاکی از آن است که الیزای غیرمستقیم طراحی شده براساس پروتئین نوترکیب np، آزمایشی حساس و اختصاصی است و می تواند در امر تشخیص و بررسی های سرواپیدمیولوژیکی به منظور پیشگیری و کنترل ویروس آنفلوانزای پرندگان در دراز مدت استفاده گردد.
