شناسایی سرولوژیکی و مولکولی ویروس موزاییک هندوانه (wmv) و ویروس موزاییک پیسک سبز خیار (cgmmv) در استان های خراسان رضوی و شمالی
چکیده
ویروس موزاییک هندوانه (wmv) متعلق به جنس potyvirusاز خانواده potyviridaeو ویروس موزاییک پیسک سبز خیار (cgmmv) متعلق به جنس tobamovirus از خانواده virgaviridae است. به منظور شناسایی wmv و cgmmv طی سالهای 1388-1389، از نمونه های برگی مشکوک به آلودگی این ویروسها در مزارع مختلف کدوئیان و گلخانه های خیار استان های خراسان رضوی و شمالی نمونه برداری صورت گرفت. عصاره برخی از نمونههایی که در آزمون سرولوژیکی das-elisa مثبت ارزیابی شده بودند بر روی گیاهان محک مربوط به هر ویروس مایه زنی شد و بر اساس ظهور علایم و بررسی مجدد با آزمون الایزا وجود آلودگی تایید گردید. جهت ردیابی مولکولی، استخراج rna کل تعدادی از نمونههای آلوده به دو روش محلول rnxtm(-plus) و رسوب با peg6000 انجام شد و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی منطبق بر ژن کد کننده پروتئین پوششی در واکنش rt- pcr قطعه ای در محدوده 822 جفت باز برای wmvو 486 و 420 جفت باز برای cgmmv تکثیر گردید. محصول pcr مربوط به دو جدایه از ویروس موزاییک هندوانه و یک جدایه از ویروس موزاییک پیسک سبز خیار توالی یابی شدند. این اولین گزارش از وجود cgmmv در استان های خراسان رضوی و شمالی است. ترادفهای بدست آمده پس از هم ردیف سازی چندگانه با برنامه clustalw2 با برخی از توالی های موجود در بانک ژن مقایسه گردیدند. جهت تعیین جایگاه تکاملی و رسم دندروگرام تبارزائی این جدایه ها از روش neighbor-joining نرم افزار mega 4.0 استفاده گردید. طبق نتایج این بررسی جدایه های تعیین ترادف شده wmv با سایر جدایه های wmv بین 99-92% در سطح نوکلئوتیدی و بین 100-96% در سطح آمینواسیدی مشابهت دارند.
