: جداسازی و کلونینگ ژن های رمزگردان آنتی بیوتیک 2،4 - دی استیل فلورورگلوسینول (dapg) از ژنوم سودوموناس فلورسنس و بررسی بیان آن در e.coli نوترکیب
چکیده
استرین های خاصی از سودوموناس های فلورسنت ساکن ریزوسفر، به دلیل حفاظت از گیاهان در برابر انواع بیمارگرها در سال های اخیر توجه بسیاری را به خود جلب کرده اند. توانایی تولید متابولیت های ضدمیکروبی از جمله خصوصیات مهم این باکتری ها می باشد که در حفاظت از گیاهان در برابر بیمارگرهای نقش کلیدی را ایفا می کنند. سودوموناس های فلورسنت قادر به تولید آنتی بیوتیک هایی هستند که در کنترل زیستی (biocontrol) بیمارگر های گیاهی نقش دارند. 2و4- دی استیل فلوروگلوسینول (dapg)، یکی از مهمترین آنتی بیوتیک هایی است که توسط استرین های pseudomonas fluorescens تولید میشود. این آنتیبیوتیک علاوه بر خاصیت ضدقارچی دارای خواص ضدباکتریایی، ضدویروسی، ضدنماتدی در شرایط آزمایشگاهی میباشد. ژن های مسئول ساخت و سنتز این آنتی بیوتیک را با حروف phlنمایش می دهند که مخفف فلوروگلوسینول می باشد. کاربرد استرینهای phl منفی (استرین های فاقد ژن های کد کننده (2,4- dapg در مقایسه با استرین هایphl مثبت، اهمیت استرین های phl مثبت را در کنترل بیماری های گیاهی نشان داده است. ژن هایی که توانایی تولید این آنتی بیوتیک را به استرین های مولد می دهد، در استرین p. fluorescens q2-87 در یک قطعه 5/6 کیلوبازی قرار گرفته اند. آنالیز توالی نوکلئوتیدی این ناحیه، شش ژن که در سه واحد نسخه برداری سازماندهی شده اند را آشکار نموده است. با توجه به این که کارایی استرین های مختلف باکتری سودوموناس فلورسنت در تولید و آزادسازی این آنتی بیوتیک متفاوت است، لذا لزوم بکارگیری بهترین استرین از این نظر ضروری می نماید. بدین منظور پس از بررسی و مقایسه استرین های گوناگون ایران از نظر تولید این آنتی بیوتیک، استرین ایرانی utpf100 از باکتری سودوموناس فلورسنت که بالاترین کارایی را از نظر تولید آنتی بیوتیک برخوردار است، انتخاب گردید، بررسی ها نشان داده است که این استرین نسبت به استرین جهانی cha0 از قابلیت بیشتری در تولید این آنتی بیوتیک برخوردار است. از طرفی کارایی متغیر استرین های بیوکنترل در زمان ها و مکان های مختلف از جمله موانع عمده توسعه تجاری عوامل بیوکنترل بوده است. اغلب این تغییر پذیری مربوط به تفاوت در خصوصیات فیزیکی و شیمیایی محیط های طبیعی است که عوامل بیوکنترل در آنجا به کار گرفته می شوند. این امر نیاز و اهمیت شناسایی و کلون سازی ژن های dapg و استفاده از فن آوری های جدید و کارآمد برای تولید محصولات آنها را بیان می دارد. بدین منظور طرح حاضر با هدف جداسازی ژن های dapgاز ژنوم باکتری سودوموناس و کلون سازی آن در وکتور بیانی pet و بیان آن در باکتری bl21 به منظور تولید بالای آن در آینده طراحی شده است.