انتقال ژن اینترفرون گامای انسانی بهمراه توالی های kdel و kozak به گیاه توتون و بررسی گیاهان تراریخت
چکیده
بکارگیری زیست مولکولی و زیست فناوری گیاهی نشان داده است که می توان بسیاری از داروها را در حجم انبوه و به قیمت بسیار ارزان در گیاهان تولید نمود. جذابیت سیستم های گیاهی بدلیل مزایایی همچون ایمنی بالا، هزینه پایین، تغییرات پس از ترجمه و حجم بالای تولید است که نسبت به سیستم های کلاسیک (مثل باکتری ها، مخمرها و سلول های جانوری) دارند. ifn-? نوعی سیتوکینین است که برای ایمنی در برابر عفونت های ویروسی و باکتریایی داخل سلولی و کنترل تومور حیاتی می-باشد. اینترفرون گاما برای درمان بسیاری از بیماری ها از جمله گرانولوماتوز مزمن و استئوپتروز استفاده می شود. در این تحقیق، بمنظور بررسی امکان و نحوه بیان این پروتئین در سیستم بیانی گیاهی، ژن ifn-? که بترتیب توالی kozak و سیگنال kdel به انتهای امینو و کربوکسی آن متصل شده اند، در ناقل بیانی pbi121 کلون شد. سازه pbi121- ifn-? ابتدا به آگروباکتریوم سویه lba4404 و سپس به ژنوم گیاه توتون انتقال داده شد. گیاهان تراریخته روی محیط کشت انتخابگر حاوی کانامایسین انتخاب شدند و جوانه های تراریخت ریشه دار شده ابتدا به پرلیت و سپس به خاک منتقل شدند. ارزیابی گیاهان تراریخت با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr)، rt-pcr و sds-page انجام شد. واکنش pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی حضور ژن ifn-? را نشان داد. واکنش rt-pcr نیز انجام رونویسی و تولید mrna مربوطه را اثبات کرد. ژل sds-page نیز علائم اولیه و احتمالی حضور پروتئین مورد نظر (ifn-?) را نشان داد. بدیهی است با استحصال و استخراج این پروتئین نوترکیب ارزشمند علاوه بر تولید انبوه و ارزان آن، گام موثر دیگری در جهت پیشرفت داروهای نوترکیب در کشور برداشته خواهد شد.