کلونینگ و بیان ناحیه ثابت زنجیره سنگین igm مرغ در e. coli
چکیده
: هدف از این تحقیق کلون کردن ژن سازنده ناحیه ثابت زنجیرµ ایمونوگلوبولین ماکیان و بررسی بیان آن در e. coliبود. در این مطالعه در ابتدا توالی ژن سازنده ناحیه ثابت زنجیرµ ایمونوگلوبولین ماکیان از بانک ژن استخراج و مورد بررسی قرار گرفت تا پرایمرهای مناسب برای تکثیر این ژن جهت rt-pcr طراحی گردد. از بافت طحال یک جوجه تازه کشتار شده rna به عنوان الگوی rt-pcr استخراج گردید.با استفاده از پرایمرهای طراحی شده ژن سازنده ناحیه ثابت زنجیرµ ایمونوگلوبولین ماکیان با روشrt-pcr تکثیر گشت. محصول rt-pcr و نیز پلاسمید بیانی پروکاریوتی pmal-c2x توسط آنزیم های محدود الاثر bamhi و hindiiiهضم شده و با استفاده از آنزیم لیگاز t4 به یکدیگر متصل شدند. این پلاسمید نو ترکیب به باکتری e. coli سویه 21 bl منتقل شد و بیان پروتئین با استفاده از روش های sds-page و وسترن بلاتینگ تایید گشت. نتایج نشان داد که ناحیه ثابت زنجیرµ ایمونوگلوبولین ماکیان با موفقیت درe. coli قابل کلون کردن و بیان شدن می باشد.