مطالعه پلی مورفیسم dna میتوکندریایی در زنبور عسل ایرانی با استفاده از روش pcr-rflp
چکیده
چکیده: شناسایی جمعیت های زنبور عسل یکی از اهداف مهم در اصلاح نژاد زنبور عسل است. جنس آپیس یا زنبور عسل دارای چهار گونه اصلی می باشد که آپیس ملیفرا یکی از متنوع ترین گونه های زنبور عسل می باشد. آپیس ملیفرا تنها گونه زنبور عسل است که دارای زیر گونه های زیادی است و زیر گونه زنبور عسل ایرانی به نام آپیس ملیفرا مدا نامگذاری شده است. بررسی پلی مورفیسم dna میتوکندریایی در چندین زمینه از مطالعات جانوری از قبیل پویایی های جمعیت، سیستماتیک و فیلوژنتیک مورد استفاده قرار گرفته است. از آنجائیکه dna میتوکندریایی توارث مادری دارد، در مطالعات بیوژئوگرافیک زنبور عسل (آپیس ملیفرا ) برای دستیابی به تبار کلنی های منفرد و نیز برای مطالعه الگوی جریان ژنی مابین جمعیت های هیبرید مورد استفاده قرار می گیرد. در این تحقیق، تنوع ژنتیکی جمعیت های آپیس ملیفرا مدا توسط بررسی پلی مورفیسم طولی قطعات برشی حاصل از تکثیر ناحیه بین ژنی coi-coii میتوکندریایی با استفاده از روش pcr-rflp، مورد مطالعه قرار گرفته است. نمونه ها(85 کلنی) از مناطق مختلفی از ایران از جمله استان های آذربایجان شرقی، آذربایجان غربی، اردبیل، مرکزی، چهارمحال و بختیاری، اصفهان، خوزستان، کهگیلویه و بویراحمد و فارس جمع آوری شدند. با استفاده از روش فنول – کلروفرم dna ی ژنومی از توراکس زنبوران عسل کارگر استخراج گردید و پس از انجام pcr اختصاصی dna میتوکندریایی از ژن trnaleuو ناحیه بین ژنی coi-coiiو تکثیر قطعه ای به طول 846 جفت باز محصول آن بر روی ژل آگارز 1درصد الکتروفورز شد. با استفاده از 5 آنزیم برشی ( rsai,taqi,drai, sspi,alui ) پلی مورفیسم مورد بررسی قرار گرفت. آنزیم های drai و sspi پلی مورفیک نشان دادند و 6 هاپلوتیپ مورد شناسایی قرار گرفت. بعنوان شاخصی از تنوع داخل جمعیتی و بین جمعیتی هتروزیگوسیتی با استفاده از نرم افزار arlequin برابر با 65/0 محاسبه شد. در این تحقیق برای کلاستر بندی نمونه ها از روش jacard- complate استفاده گردید.