ترانسفورماسیون مرکبات با ژن کد کننده ی پروتئین پوششی ویروس تریستیزای مرکبات
چکیده
امروزه ترانسفورماسیون مرکبات در اصلاح این گیاهان اهمیت زیادی یافته است. در این پژوهش عوامل موثر بر کارایی ترانسفورماسیون شامل تأثیر استوسرینگون (100 و 50 و 0 میکرومولار)، مدت زمان هم کشتی (1 و 2 و 3 و 4 روز)، مدت زمان تلقیح (5 و 10 و 15 و 20 و 25 دقیقه) و تأثیر محیط شستشو پس از تلقیح مورد بررسی قرار گرفت. باکتری مورد استفاده در ترانسفورماسیون agrobacterium tumefaciens نژاد eha 105 بود و وکتور مورد استفاده pfgc5941 حامل ژن های انتخابی مقاومت به کانامایسین و مقاومت به علف کش بستا بود. در این پژوهش سعی شد تا 2 بخش از توالی ژنی مربوط به پوشش پروتئینی 2 نژاد دور ویروس تریستیزای مرکبات به گیاه نارنج منتقل شود تا در اثر فعال سازی مکانیسم rna silencing سبب نابودی rna ویروسی گردد. میزان تولید شاخساره های+pcr در پایان پژوهش به 6/13 درصد رسید. در پایان معلوم شد که میزان 50 میکرومولار استوسرینگون در ترانسفورماسیون نارنج بهترین نتیجه را در پی خواهد داشت. در مدت زمان هم کشتی 2 روزه نیز بیش ترین شاخساره های+pcr باززایی شده زمان تلقیح 15 دقیقه نیز به عنوان بهترین زمان معرفی شد. همچنین مشخص شد که شستشوی ریزنمونه ها پس از تلقیح اثری منفی بر تولید شاخساره های+pcr دارد.