ترانسفورماسیون برنج (oryza sativa l.) با ژن epsps با استفاده از آگروباکتریوم به روش in planta.
چکیده
ژن epsps مسئول کد کردن آنزیم 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase، یک آنزیم کلیدی در مسیر بیوسنتز اسیدهای آمینه آروماتیک در میکرواورگانیسم ها و گیاهان، می باشد. ترانسفورماسیون ژنتیکی غلات یک ابزار ضروری و قدرتمند برای انتقال ژن می باشد. روش های ترانسفورماسیون مرسوم پیچیده و وقت گیر هستند. تکنیک ترانسفورماسیون بوسیله اگروباکتریوم تومفاشیینس یک رویکرد مطلوب برای انتقال ژن محسوب می گردد. روش ترانسفورماسیون in planta روشی است که در آن جنین نابالغ برنج بوسیله سوزن آغشته به محلول آگروباکتریوم تلقیح می-شود. در این روش از 2 رقم (رقم هاشمی و رقم گرده)، دو استرین اگروباکتریوم تومفاشیینس ( eha105 و lba4404) حامل وکتورهایpcambial105.1r و paj21، 3 سطح استوسیرینگون (به ترتیب سه غلظت m? 100، 50، 0) و 3 نوع تلقیح (سوزن mm 5/0 ، وکیوم و سوزن mm7/ . و خراش با اسکارپل) استفاده شد. این تحقیق بصورت آزمایش فاکتوریل بر پایه طرح کاملاً تصادفی در سه تکرار انجام شد. بذرهای تلقیح شده جوانه زدند و تحت شرایط استریل رشد کردند. با استفاده از روش pcr، بررسی مقاومت بافت های برگی به آنتی بیوتیک هایگرومایسین، آزمایش بافت شیمیایی gus و کارایی ترانسفورماسیون بررسی گردید. در نتیجه استرین eha105 و رقم هاشمی برنج ایرانی، سوزن mm5/0 به همراه وکیوم در مقایسه با دیگر تیمارها دارای بیشترین کارایی ترانسفورماسیون بودند. همچنین موفقیت ترانسفورماسیون بیشتر با آنالیز نسل t1 تایید گردید.