کلونینگ ژن فلاون سینتاز1 (fns1) از گیاه زیره سبز (cuminum cyminum) بومی ایران و بررسی بیان این ژن در حضور الیسیتورهای مختلف
چکیده
زیره سبز با نام علمی (cuminum cyminum) از خانواده چتریان می باشد. این گیاه دارای خواص ضد سرطانی و آنتی اکسیدانی است. فلاون ها از مهمترین دسته فلاونوئیدها می باشند. این ترکیبات نقش های ویژه ای در گیاهان و اهمیت های زیادی در در مان و سلامتی انسان دارند که از آن جمله می توان به خواص آنتی اکسیدانی، ضدسرطانی، ضد باکتریایی، ضد ویروسی و ضدالتهابی آن ها اشاره نمود. فلاون ها از فلاونون ها تحت تاثیر دو مسیر آنزیمی مستقل فلاون سینتاز1 و فلاون سینتاز2 سنتز می شوند. فلاون سینتاز 1، یک آنزیم دی اکسیژناز محلول وابسته به 2- اگزوگلوتارات و fe2+ می باشد که بیشتر در خانواده چتریان گزارش شده است. هدف اصلی این تحقیق: کلونینگ ژن فلاون سینتاز1(fns1) از گیاه زیره سبز (cuminum cyminum) بومی ایران و بررسی بیان این ژن در حضور الیسیتورهای مختلف می باشد. جهت کلون کردن این ژن پس از استخراج rna کل، کتابخانه cdna در حضور پرایمرهای oligo dt ساخته و تکثیر ژن fns1 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی صورت گرفت. پس از برش قطعه ژنی تکثیر شده در پلاسمید بیانی pet28a به روش شوک حرارتی به باکتری dh5? منتقل گردید. غربال گری باکتری های ترانسفرم شده بر روی محیط حاوی کانامایسین صورت گرفت و در نهایت تایید ژن کلون شده از روش، تکثیر قطعه ژنی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و برش پلاسمید توسط آنزیم های برشی اختصاصی و مشاهده محصول بر روی ژل آگارز صورت گرفت. از طرف دیگر بررسی بیان این ژن در حضور الیسیتورهای مختلف نقره، مس و عصاره مخمر نشان دهنده افزایش بیان این ژن در غلظت های خاصی بود که در آن غلظت ها، محتوی فلاونوئیدی و آنتوسیانینی و همچنین فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان (pod, cat, sod) افزایش معنی داری را نسبت به نمونه کنترل نشان می داد. لذا پیشنهاد می شود که این ترکیبات پس از ورود به سلول ها، سبب ایجاد تنش اکسیداتیو در گیاه شده و در نهایت سیستم آنتی اکسیدانی جهت مقابله با این تنش فعال می شود.